Question sur un protocole de dilution.

[aulie]

Bonjour

Voici un extrait d'un protocole de dilution et d'encemencement en microbiologie :

[*] Au bout de 24h ou plus, procéder à la détermination de la concentration de la suspension de bactéries, en préparant des dilutions décimales croissantes allant de 10-1 à 10-8 à l’aide de tube à essai contenant 9 ml d’eau physiologique stérile (1 ml de la suspension mère dans 9 ml d’eau physiologique stérile, homogénéiser puis reprendre 1 ml de cette dilution à 10-1, le verser dans 9 ml d’eau physiologique stérile, homogénéiser, et ainsi de suite jusqu’à la dilution finale 10-8. Rejeter 1 ml de cette dernière dilution).
[*] Ensemencer 0,1 ml de chacune des dilutions allant de 10-5 à 10-8, sur une boîte de Pétri pré-coulée avec du TSA (x 3 boîtes / dilution), puis les incuber à 37°C ± 1°C pendant 24h à 48h.

Je me demandais : pourquoi rejeter 1 mL du tube 10-8 ? Quel en est l'interet ?

Pouvez vous aussi me confirmer que les spores ne sont pas visibles par coloration de Gram ? Enfin qu'ils ne sont pas coloré ? Et que si on a une suspention uniquement de spore, on ne verra rien de très utile au microscope ? Et que seule la colroation de Wirtz le permet ?

Merci d'avance !
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[Moumoutte]

Bonjour,

Je me demandais : pourquoi rejeter 1 mL du tube 10-8 ? Quel en est l'interet ?

je suppose que c'est pour que tous les tubes à essais contiennent 9mL. Alors ensuite, pourquoi? ça je ne sais pas. Peut être est-ce plus facile ainsi pour la suite?

Pouvez vous aussi me confirmer que les spores ne sont pas visibles par coloration de Gram ? Enfin qu'ils ne sont pas coloré ? Et que si on a une suspention uniquement de spore, on ne verra rien de très utile au microscope ? Et que seule la colroation de Wirtz le permet ?

je laisse ça aux spécialistes

Cordialement

[Preguicoso]

Je me demandais : pourquoi rejeter 1 mL du tube 10-8 ? Quel en est l'interet ?

Personnellement, je ne vois pas d'intérêt étant donner que la dilution est effectuer et que tu ensemence des boite de pétrie avec 0,1 mL, c'est-à-dire toujours la mode quantité vis a vis de la dilution.

C'est peut-être pour donner une habitude pour des futures gammes de dilutions en tube, que tu incubera directement, le même volume de milieu permettra une comparaison plus "correcte", comme les dilutions pour déterminer les concentrations en bactéries avec les bouillons VLBL.

Pouvez vous aussi me confirmer que les spores ne sont pas visibles par coloration de Gram ? Enfin qu'ils ne sont pas coloré ?

Exact, tu repère les spores dans les bactéries car elles ne prennent pas la coloration

Et que si on a une suspention uniquement de spore, on ne verra rien de très utile au microscope ?

Certe, rien d'utile pour l'identification, et je pense même qu'elle ne prendront pas la coloration donc non visible, mais il est peu probable que tu ne retrouve QUE des spores, des bactéries en train de sporulation devrais trainer dans le coin...

Cordialement,