milieu de culture

[invite878b43a5]

salut
je me demande comment peut on préparer SVP le mileiu de culture d'helicobacter pylori
je dois utiliser COLUMBIA BLOOD AGAR BASE , le Laked Horse Blood
et aussi HELICOBACTER PYLORI SELECTIVE SUPPLEMENT
on prépare le Columibia avec de l'eau distillé et faire autoclavé 121° à 15 min et après comment peut t on ajouter du sang de cheval doit t il être autoclavé au parvant ou quoi??? et comment et quand ajouter le suplement??
sachant que le milieu doit rester au frig a +4° durant 3 jours avant son utilisation

et merci pour vos explications
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[invite7249a892]

Hello;
Pour le milieu Columbia, on autoclave 15minutes à 120°C, puis on ajoute aseptiquement 5% de sang défibriné stérile puis les répartir en boites de Pétri.
Cordialement,
Katie.

[invite878b43a5]

Merci Katie20012
une autre petite question
pour le sang je l'ai au frigidaire je l'utilise directement ou il faut le chauffer au bain de marie ????
et pour le supplément? je l'ajoute à la fin??? et comment

merci infiniment

[invite7249a892]

Hello;
La solution la plus pratique consiste à utiliser du sang vendu dans le commerce en ampoule stériles.
Maintenant si le sang que vous désirez utiliser est au réfrigérateur, ne le mettez pas au bain marie car cela risquerai de le dénaturé, ajouté-le au milieu suite à "l'autoclavage" du milieu.
C’est le cas lorsqu’on prépare une gélose au sang: on autoclave 20minutes à 120°C un mélange de protéose-peptone+extrait de foie+extrait de levure+chlorure de sodium+gélose, puis on ajoute éventuellement 5 à 10% de sang de cheval défibriné stérile au milieu en surfusion. Puis répartir en boites de Pétri.

En ce qui concerne le supplément oui normalement on l'ajoute avant emploie.

Voila j’espère que j’ai répondu à vos questions.
Cordialement,
Katie.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite878b43a5]

Merci Katie20012
c'est gentil de votre part

[invite878b43a5]

J’ai suivi au pied de la lettre tt vos instructions
Après l’autoclavage j’ai laissé le milieu se refroidir a 50° j’ai ajouté le sang le problème c que ce sang doit etre conserver bien sur entre 2 et 8° quand je l’ai ajouté le milieu s’est durci sur place avant de le mettre dans les boites de petri alors j’ai pensé de le laissé qlq min a une température 37° avant de le verser une 2ème fois sur un nouveau milieu ( juste la quantité que je dois utiliser) cette fois ci c’est gagné en fin
Mais j’espère que mon helicobatere va aimer son milieu car cette bactérie est très délicate
Merci pour vos réponse
si vous avez quoi m'ajouter je serai très reconnaisante

[invite7249a892]

Je vous en prie, je suis contente pour vous.
Si vous avez d'autres questions, n'hésitez pas à demander.
Cordialement,
Katie.

[invite878b43a5]

merci infiniment
maintenant j'attends que les colonies apparaissent tjr rien
thanks

[invite7249a892]

J'espère de tout coeur que ça va marcher, maintenant si d'ici quelques jours il n'y a toujours rien n'hésitez pas à revenir.
Bien à vous,
Katie.

[invite878b43a5]

salut Katie20012
si j'ai tardé c que je suis entraine de chercher une autre souche d'helicoacter pylori cella la est bien morte. Cette bactérie est très sensible
actuellement je cherche a l'avoir directement d'une biopsie gastrique d'un porteur ma question c'est en mettant cette biopsie dans l'eau physiologique et en la transportant vers le labo en respectant la chaine de froid a +4°. comme puis-je la broyer? avec un stomaker?? ou quoi exactemant
merci me vos réponses et bonne nuit

[invite7249a892]

Et bien oui j'aurait également pensé à le faire avec un stomaker, c'est plus pratique mais il faut faire attention du point de vu hygiéne et travailler dans des cnditions stérile.
Cordialement,
Katie.

[invite878b43a5]

bonsoir
merci de me répondre je le ferai ainsi

[invite7249a892]

Hello;
Je vous en priiiiie, très bonne nuit.
Cordialement,
Katie.

[invite878b43a5]

salue katie
En fin j’ai réussie à avoir certaines biopsies gastriques des malades qui souffraient des ulcères gastriques. Après huit jours de culture, les colonies commençaient à apparaître qui sont translucides. Bingo..
Mais il faut une confirmation que s’est la bactérie recherchée. Donc l’examen direct d’abord
Au microscope optique : ce sont des bâtonnets mais je dois faire une coloration Gram !!!
J’ai fait le test d’uréase qui est facile à faire : malheureusement ce test est négatif, à votre avis ca sera un Campylobacter ??

[invite7249a892]

Oui c'est surement un Campylobacter, parce que à part le test de l'uréase qui les différencient ils possèdent les memes caractéristiques biochimiques.
Cordialement,
Katie.