Obtention ADNc pleine longueur avec EST

[invitec19a72c7]

Bonjour,

J'aurai besoins de votre aide, j'ai une séquence EST et je dois établir un protocole pour obtenir l'ADNc pleine longueur et je ne sais pas trop comment m'y prendre.


Merci

Loïc
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[piwi]

Si vous avez l'EST, vous pouvez trouver l'ORF normalement. Du coup il n'y a qu'à écrire des oligos qui l'amplifie et une RT PCR sur un tissu soigneusement choisi devrait faire l'affaire.

Cordialement,
piwi

[invitec19a72c7]

Merci de ta réponse, le problème c'est que je cherche les extrémitésen amont et en aval pour avoir la séquence de l'ARNm complète.

Quelqu'un peut -il m'aider??

merci

[invite71f23525]

Tu blastes ta séquence contre une banque d'ARNm et tu auras ainsi l'ARNm correspondant à ton EST, si cet ARNm a été séquencé et répertorié dans la banque bien entendu. A partir de là, il ne te reste plus qu'à prendre les bonnes amorces pour obtenir ton ADNc. Chez quel organisme fais-tu ce travail?

Greg

[A voir en vidéo sur Futura]