E coli onpg- b-gal+?

[invite9ec85a7d]

Bonjour,
je cherche a déterminer un endommagement de la membrane cytoplasmique d'E.coli suite un traitement. selon les publi, je peut utilisé l'ONPG comme substract de la b gal, ce dernier (comme le lactose) ne peut pas pénétrer la membranes que si elle est endomagé (pas de b-gel perméase).
le principe semble très simple, sauf que je me demande comment la bestioles n'a pas de b-gal perméase et que l'induction de la b-gal se fait en présence de lactose, ca veut que ce dernier rentre dans la cellules??? non? est ce que ca serait plutot pas l'ONPG qui ne peut pas renter (contrairement au lactose, au lieu de comme)?
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[gorben]

Salut,
Il y a toujours une legere expression. Rare sont les systemes capables de completement stopper l'expression d'un gene. comme le systeme lacZYI fuit, s'il y a du lactose il peut rentrer et induire son transporteur.

Dans les souches de biomol, generalement juste une petite partie de lacZ est deletee pour permettre l'a-complementation.

Generalement les essais de permeabilite de membrane ne se font pas avec une b-lactamase?

A+

[invite9ec85a7d]

Bonjour gorben,
merci pour la réponse, la b lactamase est utilisé pour l'endommagement de la membrane externe et la b gal pour la membrane interne.
concernant ta réponse, si le lactose unduit l'expression de la b gal, c'est a dire qu'il arrive a pénétré la membrane interne? et c'est la ou je bloque

[gorben]

Bonjour gorben,
merci pour la réponse, la b lactamase est utilisé pour l'endommagement de la membrane externe et la b gal pour la membrane interne.

Interressant, je savais pas

Le lactose va penetrer un petit peu (via une tres legere expression de l'operon lactose par exemple). Une fois que cette infime quantitee de lactose va etre dans la cellule, le systeme va etre "legerement" de-reprime ce qui induit la synthese d'un peu plus de transporteur, qui vont faire rentrer un peu plus de lactose etc etc etc...

A+

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite9ec85a7d]

desolé Gorben, mais je suis tjrs bloqué, donc à quoi ca sert d'avoir ou pas une b-gal perméase?
j'ai trouvé dans un poly l'explication du principe de ce test, mais ca ne me convient pas : E. coli est depourvu de b-gal perméase, donc la rencontre entre le substract et la b-gal n'est possible que dans le cas d'un endommagement de la membrane cytoplasmique...
suis je b^te....

[gorben]

La permease permet au substrat de rentrer. Sans permease, pas d'entree sauf si la membrane est abimee.

L'operon lactose n'est JAMAIS eteint. Au mieux il est tres tres faible mais il y a toujours une legere fuite d'expression.
Pour te donner une idee :
* glucose+ / lactose - : activitee Plac = 1
* glucose- / lactose - : activitee Plac = 50
* glucose+ / lactose + : activitee Plac = 200
* glucose - / lactose + : activitee Plac = 1000

A+

[invite9ec85a7d]

Bonjour
j'ai bien compris maintenant, je voulais juste être sure.
Merci!