Promoteur Gal

[inviteb38fc7ba]

bonjour,

je voudrais savoir à quelle concentration faut il mettre du galactose dans un milieu de culture de levures pour induire une surexpression d'un gène sous promoteur GAL?

merci d'avance.
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[Vinc]

Salut!
Moi perso pour un promoteur inductible à l'IPTG je met 1mM... (même, si c'est pas ton cas spécifique, ça peut te donner une idée )

A+
Vinc

[Yoyo]

Salut

Pour induire l'expression de ton promoteur GAl il te faut aucune trace de glucose! Car ce n'est pas une induction sous gal mais une repression par le glucose.

Donc tant que tu as du glucose dans ton milieu ton promoteur est reprimé. Mais il y a de la fuite (comme dans tout promoteur, mais c'est moins pire que dans les bacteries)
Tu peux utiliser du raffinose (1 molecule de glucose+1molecule de galactose+ 1 molecule de fructose). Ce qui a l'avantage de ne pas trop effectuer la repression catabolique par le gluc, mais l'expression n'est pas fantastique, on fait ca en general pour permettre au levures de s'adapter a l'absence de glucose.

Sinon pour repondre a ta question, classiquement il me semble que le milieu de culture contient 2% de galactose.

YOyo

[invitefe7212d1]

Bonjour,

Je travaille sur S. cerevisiae au labo et j'utilise très fréquemment le galactose comme source de carbone (beaucoup de mes constructions contiennent le promoteur GAL). J'utilise toujours des milieux avec 2% de galactose et je n'ai jamais eu de problème.

Lilie

[A voir en vidéo sur Futura]