question de PCR

[invitebd1c6e2a]

Bonjour,

Je sais qu'içi vous savez tout donc QUESTION: Quelle est la diffèrence entre une PCR "normale" et une PCR "nichée"?!

Merci^^
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[Zellus]

Bonsoir,

Comme tu peux le voir ici, la PCR nichée (nested PCR en anglais) est une succession de PCR "normales" (deux voire plus) qui permet d'augmenter la spécificité de l'amplification.

[invite92cd8f8c]

Deux jeux d'amorces vont être utilisées: un jeu d'amorces classiques, et un jeu d'amorces plus internes (nested primers).

Cette technique est utile pour amplifier un fragment spécifique quand il existe plusieurs séquences homologues. Lors des dix premiers cycles, toutes les séquences homologues vont être amplifiées par PCR, et lors des 25 cycles suivants seule la séquence spécifique des deux jeux d'amorces va être amplifiée.

[kamor]

Ca dépend Thibaut, si tu l'as fait en une ou deux étapes. Là tu considères le 2ème cas de figure, mais on peut aussi mettre les couples d'amorces dans le même tube et lancer les deux en même temps

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite92cd8f8c]

J'avoue être un peu dans le flou, kamor.

En réalisant une PCR nichée en plusieurs étapes, on amplifie spécifiquement la séquence d'intérêt qui est en nombre très majoritaire par rapport aux autres séquences en solution.

En mettant les couples d'amorces dans le même tube, il me semble qu'on va amplifier des séquences correspondant à chaque paire d'amorces, en plus de la séquence d'intérêt.

Et on perd la spécificité d'amplification, non?