Superhélicité de l'ADN
Bonjour,
ça fait deux mois que j'ai eu un cours sur la superhélicité et impossible de re-comprendre ce que j'ai oublié
Mon texte est long, désolé :s :
D'après ce que j'ai compris la superhélicité σ = LK/LK0 avec LK le nombre de fois où les deux brins d'ADN se croisent et LK0 = nb pb/10,45 pb. On prend un plasmide pBs qu'on met dans deux souches mutantes : une qui n'exprimera que la topA (topoisomérase I) et l'autre souche n'exprimera que topA et parC (topoisomérase IV). On retire le plasmide des cellules et le but est de savoir combien de molécules ont tant ou tant de supertours. Ils mettent de la chloroquine qui s'intercale entre les deux brins d'ADN et qui fige tout de la même manière (je vois pas trop son intérêt :s)
Après il font un gel...plus on attend, et plus on a des bandes situées vers le haut du gel, donc plus on a la forme relâchée. Ce qui est normal car dans les deux souches on a pas de gyrase qui serre l'ADN. Ce que je comprend pas c'est les valeurs de σ sur les côtés du gel : déjà c'est négatif : pourquoi sachant qu'on ne peut pas avoir un LK négatif, si ? est-ce lié aux supertours négatifs et positifs ? (je sais pas c'est quoi la difference entre les deux d'ailleurs)
Sur le gel de la souche qui a seulement topA on a une valeur σ qui passe de -0,77 quand c'est superenroulé (bas du gel) à -0,048 quand c'est relâché (haut du gel). Pourquoi ? Normalement + c'est relâché, + LK devrait être petit, donc σ aussi non ? mais là la valeur est + grande quand c'est relâché que quand c'est superenroulé...
Sur le gel de droite c'est pas pareil... on a σ = 0 quand c'est superenroulé et σ= -0,039 quand c'est relaché....j'ai rien compris
Dans mon cours j'avais noté que + la molécule était relachée et plus la chloroquine ajoutait des supertours positifs...la valeur de σ serait lié au fait qu'on ait des supertours + ou - ? :s
Et au final comment on sait combien de molécules ont tant ou tant de supertours négatifs ? :s
Merci pour ceux qui ont lu jusqu'au bout ^^
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