Qui à déjà utilisé le système SNAP i.d. de Millipore pour ses Western Blot?

[invite1910b13d]

Bonjour bonjour,

Une representante de millipore m'a présenté le système SNAP i.d. qui me permettrait de faire le blocage de la membrane, l'incubation avec l'anticorps primaire, les lavages et l'incubation avec l'anticorps secondaires de mes WB en une demi heure... Ce qui est très interessant etant donné que ça me ferait gagner une journée à chaque WB!

Question: Est ce que ça fonctionne aussi bien que les incubations "normales"? Qui a déjà testé? Qui me recommande le système (ou pas!)?

Merci pour vos réponses!!!!
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[gorben]

Salut,

Tu es sur de ton coup? 30 min ca me semble bien peu pour toutes les etapes western... Ca ne serait par exemple 30min pour tout sauf les incubations d'Ac? Parce que je vois pas comment elle peut te dire qu'en 30min c'est bon alors qu'elle ne connait par exemple par le titre de ton Ac primaire ni secondaire.

J'avais vu un truc comme ca (un instrument a WB automatique), je ne me rappelle plus la marque mais grosso modo c'etait 30-60min pour toutes les etapes SAUF les Ac.

A+

[Flyingbike]

j'en ai entendu parler... mais je suis sceptique.

[invite1910b13d]

non non j'ai bien compris, c'est une demi heure pour tout: 1-2 min de blocage, 10 minutes avec AC primaire, 5 min lavage, 10 minutes avec AC secondaire, 5 minutes lavage...

En fait apparement c'est un systéme qui optimise le contact entre l'anticorps et la proteine, en faisant passer la solution d'AC à travers la membrane...

Voilà le lien si vous voulez voir à quoi ça ressemble:
http://www.millipore.com/immunodetection/id3/snap_id

Et bien sur cette appareil ne nous permet pas de passer à coté des mise au point niveau dilution anti corps... (faut pas trop en demander non plus )

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite0e9887ab]

Bonjour !


Nous l'avons au laboratoire. Et c'est tout aussi miraculeux que cela en à l'air. En une journée tout est fini. Migration, transfert, bloc, anticorps 1er, anticorps 2e, révélation, etc etc... Le résultat sur la table direct.

Enfin, comme tout système, il faut le mettre un peu au point avant, afin principalement d'évaluer la concentration optimale d'anticorps.

Chez nous, tous les anticorps spécifiques en western classique ont fonctionné avec le SNAPid.
C'est seulement lorsqu'un anticorps est déjà un peu limite en western normal que là le SNAPid risque de donner un résultat encore plus moche en terme de spécificité. Mais c'est rare.

Il faut également noté que les petites barquettes dans lesquelles il faut placer les membranes sont réutilisables. Tout, comme les petits papiers filtre.


Dizaall

[gorben]

C'est cool ca
Ca coute cher a l'usage?

A+

[invite0e9887ab]

Nous mettons la même quantité d'anticorps qu'en western classique.
Nous les récupérons après utilisation pour les utiliser à nouveau (petit bac collecteur prévu pour).
Nous réutilisons également les barquettes porte-membrane environ 4 fois. Voire plus pour certains.

Et pour finir, nous gagnons beaucoup de temps.


En réalité, je ne vois vraiment pas ce qui coute mis à part les barquettes. Et je n'en connais pas le prix de mémoire. Vous pouvez le voir sur le site certainement. Comme je le disais, il faut compter environ 4 fois par barquette. Voire plus... (ce qui, évidemment, n'est pas indiqué sur le site lol)
Et vous pouvez également tenir compte de la réutilisation de l'anticorps. Ainsi que du temps gagné.

Nous l'avions demandé en prêt avant de l'acheter. Je vous suggère de faire pareil. Ainsi, cela vous permettra de tester vos anticorps et d'être surs que cela fonctionne dans vos mains.


Dizaal

[invite0e9887ab]

Evidemment, il y a le cout de la machine

[invite30157012]

Bonjour,
On m'a présenté le même système aujourd'hui et il est déjà utilisé dans plusieurs labos de mon institut, donc apparemment c'est efficace. Après il faut voir en terme de coût c'est sûr... mais ça ne m'a pas semblé aberrant. 925 euros l'appareil, qu'il faut juste relier à une pompe à vide, et 6 euros/cassette (ce sont les consommables qui reviennent cher... évidemment) mais on eput les réutiliser 4 fois pour un anticorps donné... je pense que je vais le tester dans un labo ici qui l'utilise, je vous dirai ce que j'en pense.

[invite9eab997a]

Bonsoir,
nous aussi on s'y est mis et franchement ca marche super bien. Comme dit précédemment, les anticorps un peu pourris en blot classique resteront bof mais ceux qui tournent bien marchent sans pb.

[invitec9f0f895]

salut

Nous aussi nous venons de l'aquerir, bon les premiers tests n'ont pas ete vraiment satisfaisant, mais c'est comme tout il y a surement de la mise au point a faire.

YOyo

[Zellus]

Bonsoir,

Ca a l'air intéressant oui mais je voulais juste savoir un truc. Combien de westerns peut-on faire en même temps avec cette machine ?
Merci d'avance. ^^

[gorben]

Ca m'a intrigue, et j'ai demande a ce que l'on me prete le systeme. Je devrais l'avoir la semaine prochaine pour 1 semaine. Je teste ca et je reviens donner mon avis. Le labo qui me le prete ne l'utilise pas, il trouve ca nul. Apparement ca demande trop d'optimisation des Ac (il faut un titre vraiment tres eleve et le rapport signal/bruit est pas terrible). Un autre labo du meme groupe est dans le meme cas.

A+

[gorben]

Salut,

Bon j'ai teste le systeme sur 3 Ac. Le monoclonal qui marche tres bien, marche toujours tres bien mais en beaucoup moins de temps qu'avant
Les deux polyclonaux, l'un est tres propre et est aussi tres bien avec le systeme 30min. Le deuxieme polyclonal est tres sale en temps normal, ben la il est sortit tres propre...
En gros, j'adore le systeme ! En plus y'a possibilite de faire 6 hybridations a la fois, tout ca en 30 min j'avoue que quand on fait beaucoup de WB ca ressemble au paradis !

Le seul probleme c'est que des fois (2 fois sur 3) la cassette semble se bloquer apres le blocage (lait 0.5%) et du coup l'aspiration se fait pas tres rapidement. C'est un peu frustrant parce que ca fait perdre 10 min...
J'ai l'impression que la sensibilite est moins bonne, mais dans mon cas je m'en fout j'ai toujours un bon signal dans mes echantillons (je laisse mon film 30" au lieu de 3"...)

Je n'ai aucune idee du prix de reviens.

A+

[invite0e9887ab]

Bonjour,


Ah oui, mince. J'ai complètement oublié d'aborder le sujet. Désolée.

Nous avions également eu qq soucis avec les blocages au lait.
Tout c'est très vite résolu en remplaçant le lait par de la BSA 0,5 %.

Là, ça passe sans problème.

[invitec9f0f895]

salut

Merci pour ces retours! c'est interessant de voir que selon les endroits ca semble super ou nul!

YOyo

[gorben]

Je pense que ca depends de ce que tu attend de ton western et de tes Ac.

Je ne le ferais peut etre pas pour un western dans une optique de quantification, ou avec des Ac dont le titre est tres faible ou des proteines tres faiblements produite.
Par contre pour un western de base dont on connait le resultat et que l'on veut repeter quelques fois pour etre sur, pour un screening de souche, pour de la "non quantification", la c'est quand meme pas mal.
Faut dire que je ne suis pas non hyper regardant sur la qualite, si j'ai un beau blot pour publier je peux tout a fait me contenter de quelques blot moches par la suite tant que le resultat est clair.

A+

PS: je vais essayer la BSA parce que par contre le lait qui bloque le systeme c'est quand meme tres chiant

[invite1dfbc212]

Hello,
Je viens de voir le problème du blocage à 0,5% en lait, c'est normal,j'ai eu le même problème,c'est trop ça bloque la cassette et donc l'aspiration ne peut pas se faire.La représentatante Millipore m'a expliqué qu'il fallait se mettre au max à 0,25% (et on peut décendre jusqu'à 0,05%).
La BSA c'est cool aussi sinon !