Protocole extraction des histones

[invite1910b13d]

Bonjour,

J'ai une extraction nucléaire à faire demain, je voulais faire un extraction acide, mais je viens de me rendre compte que je ne n'ai pas de TCA à 100 %, mais du TCA à 20%...

Est ce que quelqu'un sait si je peux qd meme utiliser le TCA à 20% en augmentant les volumes???

Quelqu'un aurait un autre protocole d'extraction nucléaire??? Please

Merci d'avance pour vos réponses!
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[Flyingbike]

j'ai bien un protocole d'extraction nucléaire, mais je ne pense pas qu'il soit adapté à sortir des histones...

[invite1910b13d]

Dis toujours....

[invite71f23525]

Ton TCA dans quoi est-il solubilisé? De l'eau je suppose. Ensuite, lors de la préparation du tampon où se trouve le TCA, y a-t-il un moment où tu ajoutes de l'eau? Car tu peux ajuster ce volume d'eau au volume de TCA que tu ajoutes. Cela n'est rendu possible que si la concentration finale en TCA n'est pas trop proche de 20%...

Greg

[A voir en vidéo sur Futura]

[piwi]

Je travail un peu sur les histones et j'ai aussi un protocole adapté pour sortir les histones. Il ne contient pas de TCA.

Maintenant je me borne à cette remarque, je ne pense pas que les personnes qui m'ont donné ce protocole (qu'ils ont mis au point et qui est confidentiel) et qui me font confience, soient heureux de le voir diffusé sur internet.

[invite1910b13d]

Et donc tu vas pas me le donner? meme pas me donner des indices?

[invite1910b13d]

Ton TCA dans quoi est-il solubilisé? De l'eau je suppose. Ensuite, lors de la préparation du tampon où se trouve le TCA, y a-t-il un moment où tu ajoutes de l'eau? Car tu peux ajuster ce volume d'eau au volume de TCA que tu ajoutes. Cela n'est rendu possible que si la concentration finale en TCA n'est pas trop proche de 20%...

Greg

En fait le TCA est pas utilisé pour préparer un tampon, mais pure, il permet de précipiter les histones... En fait le protocole est le suivant:
Récupération et homogéneisation cellules dans V ml d'acide sulfurique
Centrifugation
Precipitation des histones qui sont dans le surnageant avec le TCA 100% (0.25 V)
Centrifugation... etc etc

Au pire si je trouve pas d'autres protocoles, je vais essayer de faire 1.25V de TCA (x5 en fait) en jouant sur le volume V pour pas qu'il soient trop elevé pour pas trop diluer mes histones et j'augmenterais le temps de centrifugation... Qu'en pensez vous?

[invite1910b13d]

Ouf ouf ouf, j'ai trouvé un protocole de secours!!!

J'ai tout ce qu'il me faut, dans les concentrations qu'il me faut!

En tout cas merci de votre aide!!!