Site de coupure à la TEV protease

[allan87]

Bonjour à tous !

J'ai une question très simple ! Est il possible qu'un site de coupure à la TEV se 'coupe tout seul' c'est à dire que la protéine de fusion se sépare ? A quoi cela peut il être du ?

Merci
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[allan87]

Euh une autre question tant que j'y suis !
Pourquoi mesurer la formation d'agrégats protéiques à 340 nm ?
A quoi est du le fait que la D.O augmente à cette longueur d'onde lorsque les protéines s'agrègent ? Merci

[allan87]

Quelqu'un a t'il une explication ? Merci

[Edelweiss68]

Bonjour,

Cela ne serait pas la longueur d'onde d'absorption des liaisons peptidiques?

[allan87]

Oui peut être mais n'y a t'il pas un phénomène de diffusion lors de la formation des agrégats aussi ?
Et concernant le site de coupure à la TEV ?

Cordialement, Allan

[A voir en vidéo sur Futura]

[Edelweiss68]

Si des agrégats protéiques se forment cela signifie que localement la concentration en protéines est plus élevée donc cela ne me choque pas que l'absorbance augmente...

Pour le phénomène de diffusion, je ne sais pas et de même pour l'hydrolyse du site de coupure de la protéase TEV mais j'imagine qu'en chauffant assez fort, cela doit bien rompre la liaison!

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[Yoyo]

SAlut

pour répondre a ta premiere question, tout depend d'ou se situe le site de coupure. S'il est entre deux domaines protéiques, alors il y a souvent des clivages de protéases.

YOyo

[allan87]

Merci à tous pour vos réponses !
Pour éviter de rouvrir un nouveau sujet j'aimerais vous poser une nouvelles question !

Voilà j'étudie une protéine qui est censée se dimériser en solution. Pour cela j'ai effectué des analyses biochimiques et biophysiques.
J'observe notamment après tamisage moléculaire (GF de 60 ml, injection de 3 ml de solution protéique) deux populations : une monomérique et une dimérique (vérifiée par spectrométrie pour voir qu'il s'agit bien de ma protéine).
Le problème c'est que la quantité de ma population dimérique est extrêmement faible devant celle monomérique (leger 'epaulement' en GF).

Est ce que la dilution avec le grand volume d'une colonne de tamisage peux expliquer se phénomène . Est ce que le débit, ou encore une éventuelle interaction avec la colonne pour déstabiliser la dimérisation ?! Avez vous déja observé ce genre de phénomènes ?



De plus j'ai aussi effectué une étude par SEC-HPLC (Chromatographie d'exclusion stérique sur HPLC) avec une analyse de la masse moléculaire par Diffusion de la lumière statique. Et dans ce cas j'observe principalement du dimère ! Ce qui est contradictoire avec la GF ? Comment pourrais-je l'expliquer

Je pense qu'étant donné que le débit est plus faible et la colonne de taille bien plus petite, peut etre que le dimère n'est pas déstabilisé ? C'est difficile à dire !



Merci encore et désolé pour ce long message

[allan87]

Quelqu'un a t'il une réponse Merci

[LXR]

Je pense qu'étant donné que le débit est plus faible et la colonne de taille bien plus petite, peut etre que le dimère n'est pas déstabilisé ? C'est difficile à dire !

C'est une possibilité. Lorsque tu injectes sur tes colonnes, le volume injecté est-il le même? Les tampons utilisés dans chacun des cas sont-ils les mêmes?