Bonjour,
J'essaie de comprendre une expérience où l'on veut silencer un gène (végétal).
Pour ce faire, les auteurs utilisent un système Gateway :
- vecteur donneur TOPO + produit PCR contenant le gène : vecteur d'entrée
- vecteur d'entrée + vecteur de destination : vecteur d'expression qui sera introduit dans E. coli.
Je sais bien comment ça se passe dans le cas classique, mais le problème là est que le vecteur de destination (en l'occurence pK7GWIWG2D (II), à vos souhaits) contient deux cassettes Gateway indépendantes (attR1-ccdB-attR2) séparées par un intron. Le but est d'introduire deux fois la séquence du gène d'intérêt en tête-bêche.
Je sais que la réaction LR se fait en une fois, mais je ne vois pas comment ça se passe : est-ce qu'il y a une réaction LR séparée au niveau de chaque cassette, avec deux vecteurs d'entrée ?
Merci pour vos idées!
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