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induction IPTG



  1. #1
    naadin

    Question induction IPTG

    salut

    j'ai fait une préculture d'E coli transformée (par adn polymerase taq) dans le but d'extrait le taq polymerase ,actuellement je vais faire une induction par IPTG (5mM) pendant 16 heurs (incubation) ,je sais qu'il me faut ajouter lIPTG quand la DO aboutit à 0.4mais je ne sait pas exactement pourquoi à 0.4 précisement ???

    et apres avoir le taq polymerase on fait un electrophorese des proteines dont on dispose au minimum de 3 puits : echantillon induit ;non induit; et echantillion puriffié;
    alors là ,quelles sont les differences entre les 2 echantillions :induit et non induit de points de vue resultats et caracteristiques ????
    et pour l'echantillon purifié quelle est la methode de purification la plus utilisable et quelle est le resultat estimé??!!!!
    merci d'avance

    -----


  2. #2
    LXR

    Re : induction IPTG

    Bonjour,

    L'induction à l'IPTG se fait couramment lorsque la DO est entre 0.4 et 0.8 puisque c'est le moment où les bactéries sont en phase exponentielle de croissance. Elles sont donc métaboliquement très actives, ce qui est favorables à la production protéique, et l'IPTG peut entrer dans la bactérie. En effet, en phase de latence l'entrée d'IPTG dans les bactéries est compromise (pores de la bactérie sont fermés).

    Citation Envoyé par naadin
    quelles sont les differences entre les 2 echantillions :induit et non induit de points de vue resultats et caracteristiques ????
    et pour l'echantillon purifié quelle est la methode de purification la plus utilisable et quelle est le resultat estimé??!!!!
    Non induit : témoin négatif de production protéique
    Echantillon purifié : témoin positif de production protéique (permettant de confirmer qu'on détecte la protéine d'intérêt et pouvoir la localiser sur le gel).

    Pour la technique de purification de ta protéine, avec si peu d'informations, on ne peut pas te répondre. D'autant plus si l'échantillon utilisé est de la protéine recombinante commerciale...

  3. #3
    Aqualung

    Re : induction IPTG

    Et simplement pour conclure ce que LXR a dit, si on n'induit pas avant c'est simplement pour avoir une biomasse suffisante pour la production. C'est un système de "sécurité" qui permet de séparer la production protéique en deux phase, d'abord une phase de croissance cellulaire (jusqu'à une DO de 0,4) puis une phase de production protéique (après ajout d'IPTG) ceci permettrai de contourner un éventuel problème de toxicité du composé produit. Même si celui-ci devenait létal, les bactéries déjà présentes pourraient le synthétiser et ainsi avoir une production, faible, mais minimum

  4. #4
    naadin

    Re : induction IPTG

    je vous remercie bien

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