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Problème calcul mix PCR



  1. #1
    cclilou

    Problème calcul mix PCR


    ------

    Bonjour à tous,
    Je prépare un concours cette année et je révise sur des annales des années précédentes mais je bloque pour un exercice, à savoir:

    Avec les données ci-dessous, je dois préparer un mix PCR pour un volme final de 100µL:

    dNTP 10X
    Tp Taq DNA polymerase 10X
    MgCl2 20X
    Oligo sens 0,1µg/µL
    Oligo anti-sens 0,1 µg/µL
    ADN 0,01 µg/µL
    Taq DNA polymerase 10U/µL
    Eau MQ

    Pour les dNTP et le Tp Taq, pas de problèmes je me met en concentration finale 1X ce qui me donne 10µL. Pour le MgCl2 idem ce qui me donne 5µL.
    Mais c'est maintenant que cela ce complique. Pour les oligos et l'ADN je n'ai aucune autre donnée (MM, ou Conc finale).
    Pour la Taq je ne sais pas trop à quelle concentration finale me mettre...

    En tout cas merci d'avance pour votre aide.

    -----

  2. #2
    sbrudy34

    Re : Problème calcul mix PCR

    Bonjour,

    Tu peux utiliser les oligos (s'ils ne sont pas dégénérés) à 0.5µM (0.5pmol/µl) final.
    Si tu as leur séquences, tu pourras passer de µg à µmol via leur masse molaire.
    Pour la taq, on utilise en général 1 unité par réaction, peut être 2 car je vois que ton volume final est de 100µl...

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