Problème de PCR

[ozzypo]

Bonjour, pour un travail j'ai besoin de savoir 8 raisons qui justifient une très faible quantité de produits PCR après amplification et 3 raisons qui expliqueraient des produits d'amplification multiples ou non spécifiques.
Merci
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[Edelweiss68]

Bonsoir,

Et tu as des idées?

[ozzypo]

Pour la faible quantité: pas assez d'enzyme ou enzyme pas efficace, pas assez d'amorce, pas assez d'ADN, contamination des échantillons, machine à PCR dérègler

Pour produit d'amplification multiple: contaminations, plusieurs types d'amorces

[Edelweiss68]

Pour la faible quantité: pas assez d'enzyme ou enzyme pas efficace, pas assez d'amorce, pas assez d'ADN, contamination des échantillons, machine à PCR dérègler

Pour produit d'amplification multiple: contaminations, plusieurs types d'amorces

Autres idées:

Pour la faible quantité, cela peut aussi être dû à une stringence trop élevée, par exemple si la concentration en sels n'est pas assez importante.

De même, une faible stringence va entraîner une diminution de la spécificité de réaction de PCR et cela aura pour conséquence une amplification non spécifique.

Des amorces mal choisies pourront s'hybrider entre elles et former des produits d'amplification non spécifiques.

etc...

[A voir en vidéo sur Futura]

[ozzypo]

Merci de ton aide, je n'y avait pas pensé!

[Edelweiss68]

De rien!

J'ai oublié (mais mes énumérations ne sont pas exhaustives!): si la température d'hybridation des amorces est trop basse ( = stringence diminuée), l'amplification est moins spécifique aussi.