Bonjour, pour un travail j'ai besoin de savoir 8 raisons qui justifient une très faible quantité de produits PCR après amplification et 3 raisons qui expliqueraient des produits d'amplification multiples ou non spécifiques.
Merci
-----
02/04/2010, 22h27
#2
Edelweiss68
Date d'inscription
août 2009
Messages
6 971
Re : Problème de PCR
Bonsoir,
Et tu as des idées?
02/04/2010, 22h35
#3
inviteaac3f9f9
Date d'inscription
janvier 1970
Messages
35
Re : Problème de PCR
Pour la faible quantité: pas assez d'enzyme ou enzyme pas efficace, pas assez d'amorce, pas assez d'ADN, contamination des échantillons, machine à PCR dérègler
Pour produit d'amplification multiple: contaminations, plusieurs types d'amorces
02/04/2010, 22h48
#4
Edelweiss68
Date d'inscription
août 2009
Messages
6 971
Re : Problème de PCR
Envoyé par ozzypo
Pour la faible quantité: pas assez d'enzyme ou enzyme pas efficace, pas assez d'amorce, pas assez d'ADN, contamination des échantillons, machine à PCR dérègler
Pour produit d'amplification multiple: contaminations, plusieurs types d'amorces
Autres idées:
Pour la faible quantité, cela peut aussi être dû à une stringence trop élevée, par exemple si la concentration en sels n'est pas assez importante.
De même, une faible stringence va entraîner une diminution de la spécificité de réaction de PCR et cela aura pour conséquence une amplification non spécifique.
Des amorces mal choisies pourront s'hybrider entre elles et former des produits d'amplification non spécifiques.
etc...
Aujourd'hui
A voir en vidéo sur Futura
02/04/2010, 22h50
#5
inviteaac3f9f9
Date d'inscription
janvier 1970
Messages
35
Re : Problème de PCR
Merci de ton aide, je n'y avait pas pensé!
02/04/2010, 22h56
#6
Edelweiss68
Date d'inscription
août 2009
Messages
6 971
Re : Problème de PCR
De rien!
J'ai oublié (mais mes énumérations ne sont pas exhaustives!): si la température d'hybridation des amorces est trop basse ( = stringence diminuée), l'amplification est moins spécifique aussi.