Transfo directe levure vers bactérie

[invite15d79d0b]

Bonjour à tous,

J'essaye depuis quelques semaines de transformer de l'ADN de levure dans des bactéries électrocompétentes, commerciales(E.Coli) sans passer par la case extraction d'ADN levure.

Apres avoir lu quelques publications j'ai fais differents tests (quantité de levure différentes, différents réglages de l'electroporateur, levure provenant de milieu solide ou liquide, un ou deux pulse).

Rien ne marche!

Est ce que quelqu'un aurait déjà essayé ce genre de transfo et pourrait m'aider?

merci d'avance!
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[invite71f23525]

Bonjour et bienvenue sur Futura Sciences,

Pour toi "rien ne marche", ça veut dire quoi? Peux-tu nous dire quel test tu effectues pour cribler les bactéries transformées des non transformées? As-tu regardé si, sur ton ADN de levure, il y a une origine de réplication procaryote? Et la première question que j'aurais dû te poser, de quelle nature est cet ADN que tu cherches à transférer de la levure à la bactérie? Pourquoi?

[invite15d79d0b]

Rien ne marche...c'est à dire que je n'ai pas de transformants....même pas un malheureux clone!
J'utilise des levures possédants un plasmide ayant des marqueurs pour la levure et pour la bactérie (utilisable dans les 2 organismes). Marqueur de prototrophie pour la levure et de resistance (ampi) pour la bacterie.
J'aimerais ne pas passer par l'etape extraction ADN levure pour gagner du temps.

[Flyingbike]

ben visiblement tu ne gagnes pas de temps non plus. Une extraction n'est pas si longue que ça !

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite15d79d0b]

si si
extraction ADN levure= 1h de lyticase + extraction en elle même

Et je n'ai pas qu'un tube...

Si je peux gagner 2-3h (selon le nombre de tubes) c'est toujours ca de pris...