Bonjour, je suppose au regard des résultats d'un southern blot qu'un des gènes de ma bactéries est au moins en trois exemplaires.
Pour caractériser définitivement ce phenomene; je peu tenter d'amplifier les copies via une long-pcr mais je me demandais si la pcr quantitative permettait de caracteriser ce genre de chose.
Merci pour vos reponse
Fred
oui en travaillant proprement, avec des témoins, on peut trouver le nombre de copies en PCRq et même distinguer des homozygotes et des hétérozygotes.
Salut,
et tu partirais de quoi comme matrice: adn total, miniprep!
Et qu'est ce que tu appelle témoin (je n'ai jamais fait de qPCR)
merci en tout cas
fred
En theorie c'est possible, mais je ne pense pas que ce soit le plus simple. N'avoir jamais fait de qPCR et se lancer dans une qPCR pour determiner une difference de 1 a 3 fois...Envoyé par Frikie
En plus tu n'auras pas de controle d'ADN avec une seule copie etc pour faire de la quantification relative. Ca veut dire qu'il faut que tu passes par une gamme... Perso je deconseille.
Normalement le southern, s'il est joli devrait etre une preuve suffisante. Au pire tu peux recommencer ton southern avec 2 ou 3 autres enzymes pour vraiment etre sur de ton coup.
sinon une autre methode pas trop compliquee je dirais c'est de faire une PCR nichee en utilisant un oligo specifique de ton gene, et un "random". Tu identifies tes bandes, tu sequences et tu sais combien de copies tu as, et ou elles sont (si ton organisme est sequence).
A+
