Bonjour,
j'ai un petit souci pour comprendre une technique de screening utilisée avec des phages.
C'est la technique de "Screening a Lambda library using conventional laboratory methods" décrite vers le milieu de cette page (titre en rouge).
Voilà comment je l'ai comprise:
On a à la base une librairie de phage contenant différents morceaux d'ADN. On est intéressé par l'un de ces fragments, dont on connait une partie de la séquence. Donc on réparti tout ça sur un gazon bactérien et on incube. Les phages qui ont infecté des bactéries vont créer des plaques. Après incubation, on place une membrane en nitrocellulose sur le dessus, en marquant son orientation et ensuite on va essayer de détecter les phages avec des sonde ADN radio-marquées (dirigées contre la séquence d'intérêt). Ainsi, on sait où se trouve notre phage dans notre gazon bactérien et on peut le prélever.
Mes questions sont les suivantes:
- Déjà est-ce que j'ai bien compris la technique? c'est à peu près ça??
- Dans la technique, il utilisent 2 membranes pour chaque boîte; c'est juste un contrôle ou ça a une autre utilité?
- Est-ce que quelqu'un a un exemple pratique où ce genre de technique est utilisée??
Merci bien,
Astro.
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