Salut!
Est-ce que quelqu'un pourrait me dire qu'elle est la plus petite différence de poids de deux protéines qu'on peut visualiser sur un gel de polyacrylamide? Par exemple est-ce qu'on peut visualiser une différence de un nucléotide de deux brin d'ADN? Et je crois que 1 nucléotide pèse environs 660 dalton. Moi je pense que oui cMerci pour la réponse!
Moi je pense que oui par rapport au séquençage par la méthode de Sanger...
Bonjour,
Je pense que oui, en théorie.
Un nucléotide a une masse d'environ 330 Da selon wiki.
Oui c'est la paire de bases qui fait 660 Da!! Dsl
Effectivement, vu que c'est là dessus que repose la majorité des technique de séquençage, il est possible de voir une telle différence.
Tout dépend du maillage de ton gel, de la taille de chaque maille...
Oui sa dépend de la concentration en acrylamide... alors on doit avoir un gel à quelle concentration pour visualiser une différence d'un seul nucléotide(330 Da)?
Ca depend de la taille de ton fragment... une difference de 1 nt sur un brin de 2 nt ou sur un brin de 2000 nt?Envoyé par DJATA
Oui sa dépend de la concentration en acrylamide... alors on doit avoir un gel à quelle concentration pour visualiser une différence d'un seul nucléotide(330 Da)?
A+
donc plus la séquence est courte, plus le gel gel doit être concentré et vice versa... alors si on prend un gel très concentré est-ce qu'il pourra séparer un brin de 10nt et un brin de 11nt? ou si on prend un gel peut concentré pour une grande séquence est-ce qu'il pourra séparer un brin de 2000nt et un brin de 2001nt par exemples?
Moins ton gel sera concentré, moins tu pourra voir de petite différence... il y a peu de chance que tu voies une différence entre 2000 nt et 2001, à moins que ton gel fasse 3km de longueur. Maintenant, je peux pas te donner les limites exactes de résolution d'un gel.
Donc pour une grande précision il faudrait analyser de petits fragments...?
je trouve rien à plus de 20%, et apparemment ca fait la différence jusqu'à 6nt :
Choosing an Acrylamide Concentration
Concentration(%) Optimal DNA Resolution (bp)
3.5------------------------1000-2000
5.0------------------------80-500
8.0------------------------60-400
12.0----------------------40-200
15.0----------------------25-150
20.0----------------------6-100
Ok merci pour les réponses! et si quelqu'un trouve des précisions sur les concentrations en acrylamide
