Bonjour
Ma protéine préférée apparait en WB comme un doublet de bandes très rapprochées sous certaines conditions. Je voudrais donc tester l'effet d'une phosphatase sur ma protéine pour vérifier si c'est une forme phosphorylée.
Quelqu'un a déjà traité des protéines avec une phosphatase dans cette optique ? Quel phosphatase utiliser ?
Merci d'avance
Salut,
Je parcourais un peu les topiques et en voyant le tien je me suis demandé si la précision de l'électrophorèse permettait de détecter une forme phosphorylée d'une qui ne l'est pas, 100 Da par phosphate me semblait peu ? Ce serait pas plus simple de le faire au MALDI ?
Bonne journée et désolé de répondre à ta question par une autre question
Ben je pensais aussi qu'un phosphate sur une prot de 45kDa ne se voyait pas, mais apparemment si (d'apres mes collègues). En tout cas, je suis d'accord pour le maldi, c'est plus précis, mais on ne peut pas l'utiliser sur un lysat de protéines, et puis ce n'est pas le même budget
Bonsoir,
Si tu n'as pas déjà lu :
http://forums.futura-sciences.com/bi...sphorylee.html
Merci Edelweiss, en effet je l'ai déjà lu. La question est la même que la mienne. Je ne peux pas utiliser un anticorps anti-phospho dans la mesure ou je ne sais pas si c'est une phosphorylation.
On utilise la phosphatase d´intestin de "calf" ou vachette. L´idee c´est de faire disparaitre la bande que tu penses etre phosphorylée.
Celle-ci marche merveilleusement bien en histologie. Je suis en train de la tester en western blotting.
Oui c'est ce qu'on m'a dit. Il faut maintenant que je trouve ces enzymes. Tu as une idée du protocole? (temps d'incubation, tampon, température, etc.) ?
Toutes ces questions trouvent une éponse dans la notice fournie avec l´enzyme.
Je t´envois en MP laquelle j´utilise exactement.
