Ratio de Western Blot

[invite2d628f71]

bonjour,

Ma question porte sur un Western Blot, j'ai un exercice: un western blot qui me présente les quantité de différentes protéines dans une cellule. Ma "valeur de référence" est établie par la E-cadhérine. Mon problème est que 2 protéines sont présentées, avec une même "intensité"..(la taille du trait noir est identique à quelque chose près..en langage de jeune étudiant ). La question est:
Est-ce que la cellule contient à peu près la même quantité de protéine?
Moi je pensais que oui...le western blot établissant un ratio par rapport à la e-cadhérine..mais mon professeur a dit que la réponse était non..sans donner l'explication.
je pense que je m'exprime mal..la biologie est nouvelle pour moi...je m'en excuse sincèrement.
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[Zellus]

Bonsoir !

Quand deux bandes sur un gel ont la même intensité, c'est que tu as autant de l'une que de l'autre en MASSE !!
Pour qu'elles soient présentes également en même QUANTITE dans ton échantillon, il faudrait qu'elles aient la même taille.
Si dans ton gel l'une des protéines est deux (ou cinq ...) fois plus petite que l'autre, alors elle sera deux (ou cinq ...) fois plus abondante que la grosse.

[gorben]

Salut,

Bonsoir !

Quand deux bandes sur un gel ont la même intensité, c'est que tu as autant de l'une que de l'autre en MASSE !!
Pour qu'elles soient présentes également en même QUANTITE dans ton échantillon, il faudrait qu'elles aient la même taille.
Si dans ton gel l'une des protéines est deux (ou cinq ...) fois plus petite que l'autre, alors elle sera deux (ou cinq ...) fois plus abondante que la grosse.

Je m'avancerais pas trop pour le western blot. C'est correct pour une coloration BET (ADN) ou coomassie, mais pour un western ca depend des Ac utilises. Un Ac monoclonal ne reconnaitra qu'un seul epitope / proteine par exemple. meme un polyclonal, je ne pense pas que le signal soit vraiment proportionnel a la taille.

A+

[Zellus]

C'est correct pour une coloration BET (ADN) ou coomassie

Ah oui tiens j'ai répondu trop vite parce que j'ai dit gel au lieu de membrane. ^^

mais pour un western ca depend des Ac utilises. Un Ac monoclonal ne reconnaitra qu'un seul epitope / proteine par exemple. meme un polyclonal, je ne pense pas que le signal soit vraiment proportionnel a la taille.

C'est sûr que ça peut compliquer les choses avec un western, mais je me suis dit que pour un simple exercice ...

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite71f23525]

En western blot, après quantification, on ne peut comparer deux bandes entre elles que s'il s'agit de la même protéine, révélée par le même anticorps primaire et secondaire et que la quantification est normalisée par le témoin de dépôt.

Pour ton exercice, tu ne précises pas si les bandes comparées concernent la même protéine donc difficile de te répondre. Est-ce que le témoin E-cadherin bouge entre les deux pistes?