Bonsoir tt le monde
Voila je prépare mon master et j'essaye d'optimiser le test de MTT sur les leishmanies mais j'ai tjrs des soucis pour le témoin leishmanies sans traitement avec une molécule (médicament) j'ai une DO plus faible le temoin négatif (milieu sans leishmanies) enfin le test n'est pas coherent
merci bcp de m'aider
a+
Bonjour,
En nous détaillant un peu plus le protocole, peut-être pourrions nous plus facilement vous aider.
slt tt le monde merci encore
voila j'utilise le tétrazolium blue comme test de viabilité pour tester l'efficacité de certaines molécules contre les leishmanies
en gros je cultive mon parasite je le recupere je le remets en milieu RPMI sur microplaque puis je le mets en contact avec les molecules pharmacologiques après un certain d'incubation par exemple 24heures ou plus 48 je rajoute le tetrazolium 20µl d'une solution de 5mg/ml pour un volume final de 200µl de milieu contenant des leishmanies /puit après 3à4heures d'incubation je mets 100µl de DMSO et je fais ma lecture de la plaque bien pour chaque plaque jé un blanc contenant le mileu RPMI seul et un autre temoin contenant le milieu +leishmanies mon plus grand soucis pour le moment cé qe le blanc me donne des valeurs de DO semblables à celles du temoin
jespère qe je me sui faite comprise merci d'avance a
Tu as établi une gamme étalon ?
Slt je ne comprends pa la gamme etalon de quoi si vs parlé du medicament oui bien sur mé moi mon soucis cé pour le compatage du porcentage de l'efficacité du médicament ou la molécule pharmacologique je dois calculer un pourcentage par la relation suivante
DOleishmanies traités par une dose donné-DO blanc/DO temoin leishmanies sans medicament-DOblancX100
sachant que mon blanc contient qe du milieu
et donc si ma DOtemoin est plus aible qe ma DOblanc je ne trove pa ca logique
merci
Bonjour,
J'ai eu quelques difficultés avec le test MTT que je trouve peu sensible, en tout cas avec ma culture cellulaire. Il faut t'assurer que la quantité de cellules présentes dans ton milieu suffit à engendrer une variation de DO. Ce qui, apparemment, n'est pas le cas.
Essaye avec une population plus importante. Sinon, plus cher, mais plus sensible et sur le même principe, le test MTS, qui présente en plus, l'avantage de ne pas tuer les cellules.
Bonsoir,
Merci bcp pour vos conceils je vais essyé d'utilisé une quantité cellulaire plus élevée et de changer le milieu de culture car j'ai lu le rouge phenol interfère avec le test de MTT , pour le MTS je ne peux pas me le permettre
Merci encore a+
Le sérum interfère également.
Slt , merci je ne le savais pas du tout moi qi allé utilisé un milieu ss rouge phenol mé jallé rajouté le sérum de veau fetal
Merci encore
