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electrophorese



  1. #1
    albertas

    Post electrophorese


    ------

    bonjour,
    pourriez vous m'expliquez comment exploiter une electrophorese de protéine en condition denaturante sds? ce qu'on doit savoir determiner et comment? ce qu'on doit connitre(pre-requis). Merci

    -----

  2. #2
    VilCrocrotte

    Re : electrophorese

    Alors, pour l'électrophorèse SDS Page en condition dénaturante, par l'utilisation de marqueur moléculaire (LMW ou HMW) tu détermine la masse moléculaire en fonction d'une gamme d'étalonnage où tu connais la masse moléculaire.

    Ensuite, tu relèves les rapport frontaux de chaque bande et tu fais une courbe log MM = f(Rf), comme ça, tu pourras comparer ta courbe d'étalon à ta protéine d'étude.

    ATTENTION !! Tu es en condition dénaturant, donc le gel te donne la masse moléculaire de chaque sous-unité de ta protéine ! Si tu sais si c'est une hérétoprotéine ou une homoprotéine, il n'y a aucun soucis pour connaitre le poids moléculaire de toute ta structure protéique.

    Par contre, si tu ne connais pas ta structure oligomérique de ta protéine, bah il faudra couplé cette SDS-PAGE par une chromatographie gel d'exclusion qui lui détermine la masse moléculaire mais de ta protéine entière (étant donné qu'on n'est pas en condition dénaturant avec le gel d'exclusion)

    Voilà, j'espère que je répond à ta question ^^


    PS: quelques précisions pour interpréter un gel, chaque bande constitue une sous-unités protéique, bien sur, il faut voir si ta protéine a des ponts disulfure et que durant la manip, il y a eu utilisation d'un agent réducteur (le beta-mercaptoéthanol qui réduit les ponts disulfure). Pour les homoprotéines, il est possible que tu ne puisse pas trouver plusieurs bandes de Rf différent (normal puisqu'ils ont la meme structure donc la meme migration)
    C'est pour ça que j'insiste sur le fait de savoir ou non si il y a un agent réducteur car les résultats peuvent être interpréter différament ;-D
    Dernière modification par VilCrocrotte ; 15/10/2010 à 19h09.
    VilCrocrotte !! Le super Génie !!

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