Bonjour à tous... encore une fois j'ai besoin de votre aide et je vour remercie à l'avance
Bon crois que je ne comprends pas l'immunofluorescence et j'aurais besoin d'être éclaircie à ce sujet svp ???
Ce que j'ai pu comprendre, c'est qu'on utilise le gène ou la protéine ciblée et on forme un anticorps contre celui-ci... mais ce qui émet la fluorescence, le fluorochrome, comment est-ce qu'il est incorporé ???
svp expliquer moi simplement
Merci bcp
Bonjour,
Concernant l'immunofluorescence tu trouves ça très facilement sur le net... Tu utilises un anticorps reconnaissant spécifiquement ta protéine d'intérêt (même si en pratique c'est pas toujours aussi simple et spécifique et que ça nécessite beaucoup de mises au point)
Cet anticorps est lui même reconnu par un anticorps secondaire qui lui est souvent couplé à un fluorophore (c'est simple tu commandes simplement cet anticorps couplé et tu l'utilises)
Tu peux faire ça à partir d'une culture cellulaire, d'une coupe de tissu... et visualiser où ce situe ta protéine d'intérêt grâce à un microscope à fluorescence... Voilà le plus simple à retenir
Comment fonctionne un fluorophore accroché à son anticorps ?
Salut,
C'est vrai qu'on trouve de l'info sur le net, mais je ne comprends pas et c'est pour ca que j'ai fais appel à vous...
merci
Typiquement, on utilise un fluorophore portant une fonction réactive (maleimide, isocyanate...), capable de réagir facilement avec la chaine latérale de certains acides aminés de l'anticorps (ex: lysine, cysteine).
On obtient ainsi des anticorps liés à une ou plusieurs molecules de fluorophores.
L'exemple le plus courant est le marquage à la fluoresceine (http://fr.wikipedia.org/wiki/Fluoresc%C3%A9ine). On fait réagir l'anticorps avec de de la FITC (fluoresceine isocyanate http://fr.wikipedia.org/wiki/FITC). La FITC reagit avec les lysines en formant une liaison thiouree covalente. On obtient ainsi un joli anticorps fluorescent.
Merci pour les infos
