Extraction enzymes

[invite5bb99dd0]

Bonjour,
Je dois réaliser un protocole pour mesurer l'activité enzymatique des amylases.
Pour réaliser l'extraction des enzymes de l'orge, j'ai procédé à un broyage de grains d'orge avec de l'eau distillée puis à une filtration et enfin une centrifugation pour récuperer les enzymes.
Le test au lugol de mon filtrat est positif, il y a donc bien présence d'une activité enzymatique.
Pensez vous que faire une extraction a l'eau est mieux ou pas que d'utiliser une solution tampon ?

Je vous remercie de votre aide
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[invite71f23525]

Un tampon est généralement mieux car il permet de limiter les variations de pH qui pourraient dénaturer l'enzyme au cours de l'extraction. D'autre part, il peut y avoir dans les tampons des inhibiteurs de protéases ou autres agents assurant la stabilité de l'enzyme car une extraction met la protéine recherchée en présence de composés nocifs pour la protéine : acides, protéases,... Enfin, le tampon permet de rester dans des conditions isotoniques qui contribuent au maintien de la forme native de ta protéine.

Cependant, si ton enzyme est robuste, il n'est pas étonnant qu'une extraction à l'eau t'es permis de mesurer tout de même une activité.

[invite5bb99dd0]

Je vous remercie de cette réponse.

Pour une éventuelle extraction avec un tampon, j'ai trouvé dans de la biblio un tampon d'acétate de sodium à pH = 4.7.
Le point isoélectrique des amylases est situé entre 4.5 et 5. Donc si je comprends bien en utilisant le pH =4.7, cela permet de conserver la molécule sous forme d'ions mixtes ? L'acétate permettrait lui de conserver l'enzyme assez stable ?

[invite71f23525]

Oui en se plaçant à un pH proche du pHi, on favorise la stabilité de la forme native de la protéine. En effet, la structure protéique est conditionnée par le pH qui va définir la charge des acides aminés déterminante pour la conformation finale de la protéine.

[A voir en vidéo sur Futura]