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Stérilisation



  1. #1
    Zendair

    Stérilisation


    ------

    Bonjour à tous,

    Je ne savais pas trop où poser la question mais je pense que c'est en biologie que l'on utiliser ale plus cette technique.

    Je doit stériliser des pots contenant un liquide afin de réaliser des cultures in vitro de plantes.
    Jusqu'à maintenant pas de problème, la cocotte minute faisait l'affaire : les couvercle des pots n'étaient pas vissés mais juste posés , un peu d'eau au fond de la cocotte et hop 30 minute a partir du sifflement (donc normalement à 112 °c).
    Déjà première question, pourquoi les pots ne doivent pas toucher l'eau du fond de la cocotte? (de la même manière que dans les autoclave en labo)
    Pourtant toutes les techniques de stérilisation que l'on peut trouver sur le net, il faut soit recouvrir les pots d'eau soit jusqu'à la moitié.

    Par manque de place, je me suis rabattu sur les fameux stérilisateurs qui finalement ne sont rien d'autre qu'un immense récipient (27L) avec un système de chauffe en dessous et un couvercle au dessus. Mais pas d'augmentation de pression.

    Comment puis-je procéder avec ce matériel?

    Je ne veux pas fermer les pots a stériliser car le vide qui se créé à la fin de la stérilisation risque d'amener des micro-organismes lorsqu'il va se combler. Je ne peux donc pas dans un premier temps recouvrir les pots d'eau comme le suggère la plupart de nombreux site internet. Il faudra donc que cela se fera uniquement avec la vapeur.
    J'imagine que le temps de stérilisation soit bien plus long (45 min à 90 °c suffira-t-il?).

    Quelqu'un a-t-il déjà expérimenté ce type de stérilisation?
    (ps: les cocotte minute d'un volume moindre 23 l coûtent 800 € !!!)

    Merci d'avance

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    rmi6

    Re : Stérilisation

    Bonsoir,

    Je vais tenter de t'aider avec mes pauvres moyens : cette température seule (90°C) n'est en théorie pas suffisante pour stériliser car certains microorganismes vivent dans des conditions de température comprise entre 66 et 110°C. Mais ils colonisent les milieux extrêmes, et on peut sans doute affirmer que de telles créatures ne se trouvent pas dans ta cocotte minute^^

    Deuxième et dernier élément : 45min à 90°C suffisent, en effet, pour éliminer les spores de bactéries sporulantes...

    Je laisse dorénavant la place à des gens plus calés en stérilisation

    Bonsoir

  4. #3
    noir_ecaille

    Re : Stérilisation

    La vapeur monte bien plus en température, elle est donc plus efficace que l'eau bouillante pour stériliser. Problème : maintenir la vapeur dans votre pot une fois la casserole d'eau en train de bouillir -- des chances d'y laisser un pot ou sa main (en général on préfère garder sa main).

    En autoclave / cocotte minute : à cause de la pression, l'eau doit accumuler plus d'énergie pour s'évaporer. Elle boue à une température supérieure à l'ébullition atmosphérique (~100 °C à 1 bar). La vapeur captive amplifie d'elle même ce phénomène -- d'où la présence de soupape(s).

    Il y a donc deux possibilités en autoclave :
    - stériliser à l'eau bouillant au-dessus de la température d'ébullition atmosphérique (Rappel : en montagne, l'eau boue en-dessous de 100°C)
    - stériliser à la vapeur : plus efficace car la vapeur d'eau peut accumuler/délivrer plus de chaleur que l'eau liquide à "saturation thermique" (= en train de bouillir), en effet, toute substance purifiée, à une pression donnée, boue à température constante

    Il est recommandé d'ouvrir vos pots car la vapeur d'eau va "nettoyer" les germes éventuels tandis que fermés, les spores pourront mieux résister à la chaleur.
    "Deviens ce que tu es", Friedrich W. Nietzsche

  5. #4
    Zendair

    Re : Stérilisation

    Merci pour ces réponses qui m'éclairent beaucoup.
    Je vais donc laisser mes pots, couvercle juste posé dessus, mettre une grille pour eviter le contact avec l'eau au fond du stérilisateur et laisser "pasteuriser" pendant 45 min voir 1 h. Plutôt 1 heure.

    J'ai déjà fait un test, 45 minute à la vapeur, et 30 min avec contact avec l'eau du fond du stérilisateur.
    Les 2 tests n'ont pour l'instant (5jours) pas montré de contamination. C'est plutôt encourageant.

    "stériliser à la vapeur : plus efficace car la vapeur d'eau peut accumuler/délivrer plus de chaleur que l'eau liquide à "saturation thermique""

    Je comprend alors pourquoi on évite que les pots touchent l'eau de l'autoclave ou la cocotte minute.

  6. #5
    Flyingbike

    Re : Stérilisation

    MMh ça dépend, pour stériliser du solide il n'y a pas de contact avec de l'eau et même un vide en fin de cycle pour retirer l'humidité. Pour stériliser du liquide les pots ont les pieds dans l'eau à la fin.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    noir_ecaille

    Re : Stérilisation

    Au temps pour moi, j'ai peut-être mal compris. En ce cas il faudrait fermer les pots aussi.

    S'agit-il de stériliser des pots qui vont contenir du liquide ou stériliser des pots contenant déjà un liquide à stériliser lui aussi ?
    "Deviens ce que tu es", Friedrich W. Nietzsche

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  10. #7
    Zendair

    Re : Stérilisation

    Il s'agit de pots contenant dejà un liquide qui doit être stérilisé lui aussi.
    Ca m'embête beaucoup s'il faut fermer les pots. Et encore plus si les pots doivent avoir les pieds dans l'eau. Dans ce cas si je fais plusieurs étage, seul l'étage tout en dessous aura les pieds dans l'eau.

    Il s'agit en fait de petits pots de compote pour bébé. Et les couvercle ne sont pas top du tout pour fermer hermétiquement. Dans ma cocotte minute je pose les couvercles juste dessus

    Pourquoi faut-il fermer les pots? Pour garder l'humidité et la vapeur?
    Il y a tout de même de la vapeur dans le stérilisateur mais aussi dans le pot à cause du liquide qui chauffe.

    Je rappel, j'utilise un stérilisateur qui chauffe juste de l'eau, pas de cocotte ni d'autoclave qui eux montent en pression.

    Pour infos, les 2 pots passés 45 min à la vapeur ont été contaminés par un seul germe chacun. 45 min ne suffit donc pas. Je vais passer à 1h15 et cette fois ci je mets le thermostat à 100° au lieu de 90°.

  11. #8
    noir_ecaille

    Re : Stérilisation

    Autre type de stérilisation : la tyndallisation. La méthode : on va tuer les germes, puis les germes issus des spores activées.

    Ça se passe à 60-65 °C. Les pots sont fermés, passés au bain marie durant une heure, puis re-bain maire 6h plus tard, et à nouveau bain marie 12h plus tard.

    Par contre si vos pots ne sont pas hermétiques, il y a un risque de contamination, peu importe que vous les fermiez avant ou après autoclave. Utilisez des joints en caoutchouc "alimentaire" (= les mêmes que pour les conserves style foie gras) si nécessaire, ou changez de pot. Il existe des pots à confiture peut-être appropriés à vos volumes.

    Qu'il y ait une petite vidange d'air durant une autoclave avec les pots fermés n'est pas gênant, au contraire Cette sous-pression au moment du refroidissement va coller le couvercle de façon hermétique si vous utilisez des pots adaptés. Adieu les problèmes de contamination

    Vous pouvez aussi recourir à plusieurs méthodes enchaînées :
    1 - autoclaver vos pots vides à la vapeur (= pots ouverts)
    2 - remplir vos pots
    3 - fermer les pots
    4 - effectuer la tyndallisation (sans ouvrir les pots)
    5 - puis faire une autoclave juste derrière (toujours sans rouvrir les pots)

    A vous de voir
    "Deviens ce que tu es", Friedrich W. Nietzsche

  12. #9
    noir_ecaille

    Re : Stérilisation

    Petite remarque : contre les spores, peut importe le temps passé en autoclave, seul compte la température.

    Avec des pots remplis et fermés, mieux vaut effectuer une tyndallisation -- normalement les bactéries nouvelles n'ont pas assez de temps pour "revenir à la vie" et sporuler juste derrière En revanche, la chaleur, si elle ne réussit pas à éliminer les spores, va au contraire les activer -- ce qui explique qu'on chauffe plusieurs fois avec certains délais lors de la tyndallisation
    "Deviens ce que tu es", Friedrich W. Nietzsche

  13. #10
    Zendair

    Re : Stérilisation

    Bonsoir,

    Merci encore pour ces infos.

    Alors, en fait je fais habituellement une tydallisation sans le vouloir. Car pour remplir les bocaux, je fais chauffer un grand volume de mon liquide pour faire fondre l'agar-agar. Après je distribue dans mes pots.

    Ce que je viens de faire : première chauffe pour faire fondre l'agar (100°C), j'ai distribué dans mes pots que j'ai fermé. Je l'ai ai placé dans mon chauffe-eau/stérilisateur au-dessus du niveau d'eau (pas de contact avec l'eau donc). Je les laisse maintenant 12 heures puis 1h15 à puissance max du stérilisateur (sa va bouillir). J'ai mis du sel pour augmenter la température d'ébullition.

    J'espère vraiment que ça va être ok.... J'ai mis 30 pots à stériliser.

    Je ne peux cependant pas me permettre de faire 3 chauffes/tyndallisation. Mes milieux contiennent des vitamines et ça risque de les dégrader. Déjà que 2 chauffes c'est limite...

  14. #11
    Zendair

    Re : Stérilisation

    Dernière question.

    Y a t-il vraiment un intérêt à fermer les pots avant stérilisation?

    Y a t-il par exemple une augmentation de pression dans les pots fermés lors de la stérilisation?

    Ou c'est juste pour éviter la contamination des pots après stérilisation si ceux-ci ne sont pas fermer?

    Car je posais toujours les couvercles sur les pots sans fermer et j'ai jamais eu de contamination. Je faisais ça pour éviter justement la dépression lors du refroidissement car l'entré d'air brutal lors de l'ouverture pourrait apporter justement des contaminations des milieux qui doivent rester stériles.

  15. #12
    noir_ecaille

    Re : Stérilisation

    En principe, si les pots sont hermétiques et qu'ils refroidissent sans réouverture, aucune dépression ne doit se créer -- ça c'est dans l'idéal. En pratique, que vous ayez ou non fermé vos pots pendant le conditionnement/stérilisation, vous devrez tout de même les manipuler en zone stérile (bec Hoffmann ou à gaz) si vous voulez éviter les contaminants.

    Après c'est à vous de jauger en fonction des résultats.

    Par contre la tyndallisation ne se fait justement pas à 100°C, cette méthode ayant été conçue pour stériliser des milieux fragiles : inutile de tout faire en autoclave, surtout si le milieu contient des molécules thermolabiles (vitamines). Un bain marie à 65 °C est plus que recommandé.

    Je vous recommandais de stériliser vos pots ouverts en autoclave avant d'y couler quoi que ce soit, afin de réduire encore les risques de contamination. Ensuite, faites vos remplissages, puis procédez à une vraie tyndallisation -- bain marie 60 minutes avec surveillance ou paramétrage de la température à 60-65 °C, trois fois en respectant les délais d'attente.

    Normalement à 60-65 °C, aucune surdépression ne devrait se créer. Il est recommandé de fermer les pots afin d'éviter les contaminants aérosols durant toute la tyndallisation, vu que l'atmosphère ne sera pas à saturation thermique ni en champ stérile (atmosphère normale).
    "Deviens ce que tu es", Friedrich W. Nietzsche

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