gene CAT expression et ERE

[invitec7cfcba7]

ReBonjour!
j'ai un examen demain et je bloque sur un exo type

Alors voila on construit deux plamides,un noté A contenant le gen CAT et un promoteur eucaryote et le plamide A/ERE contenant la meme chose en plus d'une sequence cis regulatrice ATGTCACTGTGACCT en amont du promoteur.
On sait que ERE a la sequence AGGTCANNNTGACCT (ou N est un nucleotide quelconque)
Puis on transfecte des cellules MCF7 soit par le plasmide A et un vecteur de normalisation,soit par l'autre plasmide et un vecteur de normalisation.
Après transfection les cellules sont mises en présence du milieu de base+E2 (estradiol) ou du milieu de base seul

Les résultats donnent une activité CAT de 1 dans le milieu seul et dans le milieu avec estradiol

Je pence que la séquence régulatrice ne permet pas l'interaction avec E2 et que sans séquence régulatrice E2 ne peut pas se fixer pour moduler la transcription?je suis un peu perdu..

C un peu long..Merci d'avance pour les réponse
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[piwi]

Bonsoir,

ERE est pour oestradiol response element. C'est une région où se fixe le récepteur de l'oestradiol une fois qu'il a fixé son ligand dans le cytoplasme.

Votre manip' a pour but de déterminer dans quelles mesure vos cellules expriment les récepteurs des oestrogènes.
En gros, votre plasmide A vous sert à évaluer le niveau de base de l'expression de votre construction.
plasmide A + rien --> vous n'en attendez rien. Contrôle négatif
plasmide A + oestradiol --> Là encore contrôle négatif, permet simplement de mesurer dans quelle mesure l'ostradiol peut agir dans la cellule pour stimuler l'expression de votre transgène de manière inattendue.

plasmide ERE + rien --> Vous donne éventuellement une idée de la présence d'ostradiol dans votre milieu de base. Vous ne devirez rien obtenir, ou pas grand chose.

plasmide ERE + oestradiol --> C'est le point clé. Si la cellule exprime des récépteurs des oestrogènes, alors ceux ci vont capter l'oestradiol et aller se fixer sur votre plasmide pour en activer la transcription.
Si il n'y a pas de récepteurs dans la cellule, il ne se passe rien.

Cordialement,
piwi

[invitec7cfcba7]

Merci beaucoup j'ai enfin compris!
Mais dans la suite de l'exo on transfecte des cellules HT29 avec le plamise A/ERE et un vecteur permettant l'expression de E2 et les resultats de mesure de l'activité CAT sont toujours de 1.
Puis je vous demander si c'est toujour en rapport avec des recepteurs aux oestrogenes?ou est ce parceque E2 ne s'exprime pas?

[piwi]

Est il possible que vous mettiez en ligne l'énoncé exact ou le papier dont il est issu (à défaut une référence)?
Ce sera beaucoup plus simple de dire quelque chose en ayant l'ensemble des informations et des figures.

Cordialement,
piwi

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