Enzymologie hétérogène

[invite39dcadc1]

Bonjour,

Je viens de faire un TP afin d'étudier la glucose oxydase (GOD) immobilisée. Je fais la cinétique enzymatique de la GOD à forte et à faible agitation. Parallelement, je fais la cinétique enzymatique de la GOD en solution. Ma question concerne l'analyse de mes résultats.
Normalement, la GOD immobilisée à forte agitation a une action qui ressemble à une enzyme michaelienne (j'obtiens une hyperbole pour V=f(S)).Or, la Vm doit être quasiment identique. Mais, ma Vm de GOD en solution est de 23µM/min et Vm de GOD immo à 2.6µM/min.
Je ne vois pas pourquoi j'obtiens des valeurs différentes pour la Vm?
Une deuxième question, la Vm de la GODimmo à faible agitation, doit-elle aussi se rapprocher aux deux autres??Je dirai plutôt que oui, ou dans les pire des cas elle doit être inférieure à celle de GOD à forte agitation, or c'est l'inverse dans mon cas.

J'attends vos hypothèses. J'espère que j'étais claire. Merci.
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[Jean-Luc P]

C'est normal une enzyme immobilisée est moins efficace car sa structure est contrainte par les interactions avec le support.

Elles ont toujours une v_max plus faible et un K_M plus élevé.

[invite39dcadc1]

Je suis d'accord que les Vm de l'E immo et en solution ne soient pas les mêmes, mais une différence de telle ordre de grandeur est-elle possible??

[invite2fb83916]

L'ordre de grandeur est "le même".
Dans les deux cas vous avez des µM/min. Cela ne me choque pas outre mesure.
Le plus important de toute manière n'est pas forcément le résultat, mais d'avoir la capacité de discuter! Si vous avez une bonne argumentation pour expliquer les resultats obtenus c'est ce qui comptera finalement!

[A voir en vidéo sur Futura]

[Pfhoryan]

L'ordre de grandeur est "le même".

Disons qu'il y a "un" ordre de grandeur de différence (facteur 10).
Et effectivement, ce n'est pas choquant. Mais mieux vaudrait quand même comparer les kcat que les Vmax. Difficile de savoir d'après la description donnée si de l'enzyme à éventuellement été "perdue" lors de l'immobilisation.
Il serait aussi intéressant de savoir si l'enzyme immobilisée s'avère plus stable, car il y a souvent un compromis entre activité et stabilité.

[invite39dcadc1]

Merci pour vos réponses.
Effectivement, il y a plein d'analyses qu'on peut faire par la suite. La stabilité de l'enzyme a été effectivement étudiée; elle n'est pas changée. L'immobilisation est faite sur les 2 surfaces d'une membrane (forme de disque) par liaisons covalentes des groupements amines de l'enzyme avec des groupements aldéhydes du support.
D'ailleurs revenant au sujet, la question de comparaison des Vm entre E en solution et E immo ne se pose plus, puisqu'on ne connait pas la quantité d'enzyme qui s'est fixée sur le support.