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spectre d'absorption et ADN



  1. #1
    pegazoulleeuh

    spectre d'absorption et ADN

    bonjour

    j'ai un exercice que je ne comprend pas du tout ..
    on me dit :

    soit un ADN naturel mitochondriale de lapin [0.4M], bicaténaire, hélicoïdale, circulaire, comportant 500pb et un ARN naturel d'E.Coli [0.4M] monocaténaire, pseudo-hélicoïdale à 30% comportant 250b

    tracez sur le même graphe leur spectre d'absorption de la DO en fonction de la longueur d'onde de 200 à 400nm. Justifiez.

    je comprend pas du tout la question en faite ..
    merci d'avance à ceux qui m'aideront a comprendre

    -----


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  3. #2
    TanguyE

    Re : spectre d'absorption et ADN

    Bonsoir,

    Il faut que tu trouves une propriété des acides nucléiques qui agit sur la lumière et donc la densité optique.
    Cette propriété est modifiée dans une certaine condition de configuration des acides nucléiques, laquelle?

  4. #3
    pegazoulleeuh

    Re : spectre d'absorption et ADN

    je sais que la présence des bases azotées dans l'ADN fait qu'il absorbe les rayonnements UV et donc pic d'absorption vers 260 nm.

    La température change la conformation de la molécule d’ADN et donc sa densité optique ? et ADN double brin très stable ?

  5. #4
    TanguyE

    Re : spectre d'absorption et ADN

    Citation Envoyé par pegazoulleeuh Voir le message
    je sais que la présence des bases azotées dans l'ADN fait qu'il absorbe les rayonnements UV et donc pic d'absorption vers 260 nm.
    Exact.

    Citation Envoyé par pegazoulleeuh Voir le message
    La température change la conformation de la molécule d’ADN et donc sa densité optique ?
    Oui: on appelle ça l'effet hyperchrome.

    Du coup que peux tu dire de tes 2 molécules, concernant leur DO aux alentours de 260 nm?

  6. #5
    pegazoulleeuh

    Re : spectre d'absorption et ADN

    la chaleur fait que les deux brins se séparent si bicaténaire
    et l'absorbance est plus élevé pour une monocaténaire qu'un bicaténaire je crois a cause des liaisons plus facile a rompre pr un monocaténaire.

    mais je vois pas trop comment mettre tous ca ensemble :s

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    TanguyE

    Re : spectre d'absorption et ADN

    Une fois que tu sais tout ça, c'est assez simple.
    Ton graphe doit représenter la DO en fonction de la longueur d'onde.
    Tu as d'une part ta courbe pour l'ADN qui forme un pic de DO à 260 nm.
    Et ta seconde courbe correspondant à l'ARN qui est simple brin forme également un pic de DO à 260 nm mais plus grand.
    Le reste du temps les 2 courbes sont à 0 de DO

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  10. #7
    pegazoulleeuh

    Re : spectre d'absorption et ADN

    sur mon même graphe j'aurais donc

    un pic a 260 pour l'ARN avec une DO élevée et en dessous le même mais moins élevé en faite ?

  11. #8
    pegazoulleeuh

    Re : spectre d'absorption et ADN

    MAIS alors pourquoi parler de la concentration et de la taille du fragment dans l'énoncé .?

    merci beaucoup en tout cas

  12. #9
    TanguyE

    Re : spectre d'absorption et ADN

    Ah j'ai oublié cette partie là.

    En fait comme tu as la même concentration dans les 2 échantillons, il y a autant de molécules. Cependant l'ARN comporte deux fois moins de paires de bases que l'ADN.
    Donc la DO du pic d'ARN devrait être moitié moins élevée que celle du pic d'ADN (moins de bases = moins d'absorbance).
    Cependant l'ARN étant simple brin, l'effet hypercrhome augmente la DO d'environ 30-40%. Mais attention ton énoncé dit que 30% de l'ARN est enroulé, donc ces 30% là "perdent" l'effet hyperchrome.

    Du coup si on prend par exemple un pic de 1 pour l'ADN, l'ARN devrait être à 0.5, mais avec l'effet hyperchrome, une partie se retrouve avec +40% donc 0.7. Or tu as 30% de ton ARN enroulé donc à 0.5 et 70% simple brin donc à 0.7. Ce qui donne au final: DO du pic ARN= (30%*0.5)+(70%*0.7)= 0.64.

    J'espère avoir été assez clair.

  13. #10
    pegazoulleeuh

    Re : spectre d'absorption et ADN

    a je crois que j'ai compris !
    je vais reprendre tout ca tranquillement

    merci beaucoup !

    j'ai une autre question si possible a éclaircir aussi :s
    on me dit :
    on soumet le mélange des 2 acides nucléiques ADN naturel et ARN naturel à pH=7 et 12 a une électrophorèse en gel d'agarose.
    représenté le gel obtenu a pH=7 et 12, justifiez.

  14. #11
    kamor

    Re : spectre d'absorption et ADN

    Comment se passe une migration en gel d'agarose ? Quel effet a le pH sur celle ci ?

  15. #12
    pegazoulleeuh

    Re : spectre d'absorption et ADN

    une électrophorèse en gel d'agarose permet la séparation des acides nucléiques chargés négativement suivant un champs électrique.
    les petites molécules migreront plus vite et plus loin que les grosses.

    justement le pH dont on parle c'est celui du tampon ? c'est ca que je comprend pas en faite ..

    merci

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  17. #13
    kamor

    Re : spectre d'absorption et ADN

    Il faut savoir ce qu'est le pH. Suivant le pH, les ions H+ seront plus ou moins disponibles ou pas, donnant donc une charge à la molécule suivant sa formule.

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