Bonsoir,
J'ai un petit souci sur un exercice, voici l'énoncé :
Pour déterminer l'activité d'une enzyme sérique, la phosphatase alcaline, on se place dans les conditions expérimentales suivantes : à 1mL de tampon glycine, on ajoute 1mL se substrat, le paranitrophénylphosphate (pNPP), à la concentration de 1mM, puis 0.5 mL de sérum. Après différents temps d'incubation, on ajoute 1mL de soude et on lit les densités optiques (DO). Par ailleurs, on prépare des tubes témoins. A partir de cette cinétique (DO=f(t)), on détermine une pente qui est égale à 0.03 min-1
1) Sachant que dans ces conditions expérimentales, une variation de DO de 1 correspond à l'hydrolyse de 1 micromole de substrat, déterminer l'activité de cette enzyme en micromoles/min/litre de sérum.
2) Quelle est l'utilité de préparer des tubes témoins ?
3) Quelle est l'intérêt d'ajouter 1mL de soude ?
4) Pourquoi utilises-t-on du pNPP comme substrat ?
Réponses (à confirmer) :
1) Alors j'ai fait correspondre les unités, sa m'a donné 33 333 micromoles/min/L...
2) Le pNPP s'hydrolysant (en partie) spontanément : on inhibe directement la phosphatase alcaline en ajoutant de la soude (ce tube servira de ''témoin'' (de comparaison) pour les autres tubes);
3) Intérêt : stopper la réaction.
4) le PNPP s'hydrolyse en PNP, et on peut lui mesurer sa DO (se colore en jaune en solution alcaline).
Merci
Bonne soirée
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