E.coli DH5a résistante à la paromomycine?!

[invite44f8195c]

Bonjour,

J'ai un petit soucis dans ma manip de transformation de DH5a =/
J'utilise de la paromomycine comme agent de sélection et surprise! j'ai des colonies sur mon témoin négatif qui poussent en présence de l'antibiotique après 48h!
(En général on laisse que 24h après étalement mais là j'ai pas une efficacité de transfo énorme alors j'avais laisser plus de temps aux cellules pour se reprendre)
Les cellules sont neuves, je ne les ai jamais décongelées recongelées avant la manip et vu qu'elles sortent de chez le fournisseur, elles sont sensées ne pas être contaminées!
Alors je sais pas trop pourquoi ça pousse et ça m'embête un peu pour sélectionner mes clones dans les cellules transformées.

Alors je sais pas, peut-être que quelqu'un à déjà eu ce genre de problème (avec la kana ou la néo sinon, c'est très proche de la paromo) et peu m'aider, parce que si je doit considérer ça comme un bruit de fond de ma souche, ça va pas être terrible.
(Surtout quand on me les vend comme sensibles!)

Merci d'avance et bonne fin de journée
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[invite89237bf6]

Le probleme avec les antibiot aminoside c est que tu ne sais jamais quand ca va marcher ou qund ca va foirer...

de toutes facons quelques soit la reponse a cette question le resultat reste le meme... Tu dois tout recommencer C est la malediction du controle negatif !

[invite44f8195c]

Et oui, faut tout recommencer
On va voir si cette fois-ci j'ai le même problème...Croisons les doigts!

[invite853321bf]

Es tu sure que ton antibiotique est encore bon ?
Car ça m'est arrivé une fois avec de la kanamycine, et il s'est avéré que la kanamycine était périmée et vraiment inefficace.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite44f8195c]

J'utilise la même solution mère qu'une collègue qui fait des détermination de CMI et elle n'a pas eu de résultats abérants donc l'antibiotique à l'air encore bon...
Mais peut-être que le fait de laisser à 37°C plus de 24h ne flingue =/