Salut!
Est ce que vous connaissez une technique qui permettrait de mettre en évidence une intéraction entre 3 protéines, elles même en intéraction avec de l'ADN? Bien sûr sans passer par le double hybride....(sinon c'est trop facile)
Je ne suis pas sûr que le triple hybride puisse s'appliquer ici!
Merci pour vos lumières mais je reste très septique quant à l'existence d'une telle manip!
A+
Vinc
Co-immuno-précipitation ? Chromatine IP ?
Salut!
Et bien pour la co immuno je pense pas qu'on puisse mettre en évidence une intéraction avec l'ADN.....Envoyé par P'tite_fleur
Merci de ta réponse!
Et la chromatine IP, ça va, alors ? Tu connais la séquence d'ADN ou pas ?
le triple hybride c'est pour mettre en evidence des proteines interagissant avec un ARN non? Je vois mal l'apport dans le cadre d'une etude d'interaction avec de l'ADN
Un chromatine IP me semble aussi plus appropriée.
Oui mais en fait c'est juste pour trouver une alternative à une publie!
Ils utilisent le DH et la co immuno pour mettre en évidence des intéractions entre 3 protéines. Ce complexe intervient dans la compensation de dose chez la drosophile. Pour faire simple, la prot 1 intéragit avec la prot 3 et la prot 1 intéragit avec la prot 2 mais les prot 2 et 3 n'intéragisent pas ensemble. Donc en gros la prot 1 fait le lien avec les prot 2 et 3. Et ce complexe intéragit avec l'ADN.
Mais je me demandais si on ne pouvait pas obtenir les résultats du double hybride en une seule étape...et également savoir si ce complexe intéragit ou pas avec l'ADN.
Donc voilà, ce n'est pas un projet de recherche c'est juste une question que je me posais comme ça!
Oui c'est ce qu'il me semblait aussi c'est pour ça que j'ai dit dans mon premier message que je ne croyais pas au triple hybride dans ce cas là.
oky. Si c'est juste pour habiller un peu mieux ta publi je pense que la ChIP est peu de trop. C'est pas le genre de manip' que l'on fait en complement quand même
salut
Par Biacore (SPR) ca doit pouvoir se mettre en evidence, tu couples P1 sur le chip, tu fais passer P2 jusqu'a saturer P1 puis P2 + P3 pour saturer P1P2 en P3, puis tu passes de l'ADN pour voir si tu as encore une augmentation du binding...
A+
NONONONONONON ! Le double/triple hybride n'est pas une technique qui met en évidence l'interaction ARN/P mais P/P.
Oui ca c'est pour le double hybride mais le triple hybride s'applique à l'ARN...
voir ce lien
ou
le triple hybride
Oui sauf que P2 et P3 n'intéragissent pas ensemble dans tu ne peux pas avoir P3 qui sature P1P2 je pense....enfin si ça doit pouvoir se faire mais peut-être en inversant et en saturant P2 par P1 puis P2/P1 par P3....
oui mais si je disais d'injecter P2 + P3 c'etait pour pas que P2 se dissocie de P1 pendant l'injection de P3. Si P2 se dissocie, le biacore enregistre une baisse d'interraction compensée par le binding de P3... au final tu manque le binding de P3 a cause de la dissociation de P2.
En plus ton cas est ideal vu que P2 et P3 n'interragissent pas ensemble, en injectant les 2 en meme temps P3 seul va lier le complexe P1/P2 deja en place (tu auras tjs une petite dissoss de P2 mais qui va etre compensé par son re-binding).
Si tu sature P2 en P1, puis si tu injectes un melange de P3/P1 tu auras un binding P1/P3 avant l'injection sur biacore et tu risuqes de passer à coté.
Tu peux injecter P3 seul aprés le passage de P2 sur P1 que si l'interraction P1/P2 est trés forte et indossociable (rare, sauf certains bindings Ac-Ag).
A+
Merci à tous pour vos réponses!
A+
Vinc
