Bonjour,

je recherche un système d'extinction provisoire de gène in vivo afin d'étudier la fonction de gènes dans les néphropathies chroniques.
Jusqu'à présent, le labo dans lequel je viens d'arriver se contentait du système Cre/Lox pour invalider le gène spécifiquement dans les cellules du rein chez la souris.

Mais nous cherchons maintenant à éteindre un gène transitoirement dans le rein et à s'affranchir du temps nécessaire au croisement entre souris du systeme Cre. Ma chef m'a demandé de débroussailler le sujet.

D'après mes recherches, plusieurs approches existent, mais j'aimerai avoir des retours quand à leur mise en oeuvre/efficacité.
Pour résumer, nous avons le choix entre l'injection d'un siRNA ou l'expression d'un shRNA par un plasmide ou vecteur viral.

L'approche siRNA est simple, le knockdown transitoire dépend de la dilution progressive/dégradatio des siRNA injectés mais quid de son efficacité? cad quelle quantité à injecter? le ciblage spécifique du rein (en faite le shRNA peut très bien inhiber l'expression du gène dans d'autres organes)

Si on part sur du shRNA, 2 approches s'offrent à nous. Elle sont ttes 2 basées sur une expression inductible du shRNA (system Tet)
-l'intégration d'un système tet-shRNA dans les cellules du rein par injection de vecteurs lentiviraux chez la souris.
-l'introduction du système tet-shRNA directement dans des blastocystes afin de générer une lignée de souris transgénique.

Dans ces 2 cas, l'induction de knockdown est activée par l'injection de tétracycline. Cette technique semble demander plus de préparation que les siRNA mais semble plus efficace.
Pourtant, chez les fournisseurs, on retrouve plus l'association siRNA/in vivo et shRNA/in vitro?

Si j'ai dit des bétises plus haut, merci de me corriger.
Bref, après avoir fait le tour de la biblio et des solutions fournisseurs je suis à la recherche de conseils de personnes ayant vraiment expérimenter la chose.

Quelques liens fournisseurs sur le sujet:
http://www.labomics.com/index.php?pa...emart&Itemid=1
http://www.taconic.com/wmspage.cfm?parm1=3967