Utilisation de Klenow

[invite69704257]

Bonjour,

Je viens de digerer un plasmide (pour le lineariser) avec une enzyme creant des bout cohesifs (extremite 5' depassant). Je voudrais rendre cette extrimite "blunt" en utilisant une klenow.
Je voudrais juste savoir si je peux utiliser la klenow directement apres ma restriction sans inactiver au prealable l'enzyme de restriction et sans purifier le plasmide linearise a partir d'un gel.

Merci d'avance!
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[Flyingbike]

il faut inactiver l'enzyme préalablement, sinon elle va continuer a couper. Pas besoin de purifier le plasmide, tu peux le faire ensuite. Il faut quand même que la klenow puisse fonctionner dans le tampon utilisé pour la digestion.

[invite28f6e6c6]

Par habitude, desactive toujours ton enzyme avant de faire autre chose car en changeant de tampon tu peux modifier la spécificité de son activité.