B-Galactosidase d'origine vegetale

[invite66e26563]

Bonjour,

J'aimerai vous demander quelques questions pour ceux qui sont allaise dans ce domaine.

Je dois faire l'extraction, la purification et la caracterisation d'une beta-galactosidase d'une pomme (300g)

1- Pour l'extraction, j'ai fait bcp de recherche puis j'ai constate que le tampon d'extraction le plus utilise est le NaOAc avec du mercaptoethanol. Comment savoir le %, la concentration de mon tampon ???

2- Pour la purification je vais utiliser une precipitation au sulfate d'ammounim [(NH4)2SO4] . Comment savoir le % de mon sulfate d'ammonium ?? Ca doit etre entre 40 - 70 %

3- Par la suite, pour les etapes de chromato. Je vais utiliser une chromato d'echangeur d'ions CM-Bio gel suivi d'une second chromatographie cette fois ci d'affinite (Lactosyl Sepharose). Comment savoir quoi utiliser : le tampon, la quantite de resine,la quantite d'echantillon ????


MILLES MERCI A CEUX QUI PEUVENT M'AIDER.
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[Edelweiss68]

Bonjour,

Votre question est-elle de savoir comment réaliser vos solutions ou quel pourcentage choisir ?

Avez-vous un protocole ?

[invite66e26563]

Mes excuses, j'ai peut etre mal formule ma question. Je n'ai pas de protocole a suivre. Au fait, c'est moi qui doit rediger le protocole.

Donc, je voulais savoir les solutions a utiliser avec leur pourcentage ou concnetration

[invite01934724]

1- Pour l'extraction, j'ai fait bcp de recherche puis j'ai constate que le tampon d'extraction le plus utilise est le NaOAc avec du mercaptoethanol. Comment savoir le %, la concentration de mon tampon ???

d'apres la reference que j'ai trouve pour extraire l'enzyme tu utilises l'acetate de Na 25 mM c'est a dire NaOAc pH 4,5 avec du pvpp 0,5% (p/p), et 0,1 (v/v) beta mercaptoethanol.
voici un lien qui pourrait t'aider!
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/arti...df/1060521.pdf

2- Pour la purification je vais utiliser une precipitation au sulfate d'ammounim [(NH4)2SO4] . Comment savoir le % de mon sulfate d'ammonium ?? Ca doit etre entre 40 - 70 %

pour la precipitation tu dois utiliser le tableau avec les concentrations de sulfate d'ammonium c'ad combien de grammes de sulfate d'ammonium faut ajouter pour avoir 40% puis tu regardes a partir de 40% combien de grammes tu dois encore ajouter pour avoir 70%
pour les deux chromato je te reponds demain car moi de mon cote je dois finir mon rapport de ''methodo''
si tu peux m'envoyer ton courriel ca peut etre plus simple peut etre qu'on frequente la meme universite

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite5b779f46]

Bonjour,



J'ai la même expérience à réaliser avez-vous des conseils ou des explications concernant l'extraction, le volume de solution à utiliser par exemple.

Merci et Bonne journée.

[invite8a9454fa]

Bonjour,

Pour les étudient qui ont déja faire le protocole de méthodologie biochimique

moi je dois faire l'extraction, la purification et la caracterisation d'une beta-galactosidase d'une pomme (300g)

1- Comment je peux s'avoire les tempons utilisé pour les différent étape : tompon de la réaction enzymatique, tompon d'extraction et tempon de chargement et de lavage pour chromatographie DEAE

2- dosage de protéine et courbe standard par méthode de lowry et la méthode d'estimation de la consentration en protéines par mesure d'absorbance en UV
3- dosage de l'activité enzymatique et courbe standard
merci