Bonjour,
J'ai un problème concernant un TP de 2ème année de pharmacie, sur la détemination des paramètres cinétiques de la B-galactosidase.
Voici la préparation de la solution:
Solution dONPG (mL) 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,6 0,8 1
Tampon phosphate 2 1,9 1,8 1,7 1,6 1,4 1,2 1
Agiter au Vortex et préchauffer 5min à 30°C
Solution B-gal 1 1 1 1 1 1 1 1
Agiter. Incuber à 30°C pendant 2min exactement mesurés
Solution Na2CO3 1 1 1 1 1 1 1 1
Agiter au Vortex. Lire l'absorbance à 420 nm.
Absorbance 0 0,304 0,6 0,931 1,166 0,994 1,559 1,668
Tracer la courbe obtenue en portant en abscisses la concentration d'ONPG (exprimée en mol/L de milieu réactionnel) et en ordonnées la quantité d'ONP formée par unité de volume de milieu réactionnel et par unité de temps(mM/min).
Je dois obtenir une représentation de Michaelis tendant vers une asymptote correspondant à la vitesse maximale de la réaction; Hors j'obtiens une droite.
Dois-je tenir compte du facteur 4 de dilution si on me demande une concentration par litre de mélange réactionnel?
A quoi correspond la quantité d'ONP formée?
Merci.
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