mesurer un antibiotique dans les conditions d'asepsie rigoureuses

[invitefa0ab781]

Bonjour à tous,
Je voudrais savoir comment mesurer de la poudre d'antibiotique utilisée pour la détermination de la CMI ,en évitant toutes contaminations.

Merci
-----

[Edelweiss68]

Bonjour,

Pouvez-vous préciser votre question et son contexte ? Voulez-vous effectuer un remplissage aseptique à partir d'une poudre d'antibiotique déjà constituée ? De quoi disposez-vous ?

[invitefa0ab781]

bonjour ,

Je m'explique: Si je veux réaliser une CMI sur gélose ou d'effectuer un test à la claxocilline ,exemple :25 mg .Comment pourrais-je peser et rajouter la poudre d'antibiotique dans la gelose Mueller Hinton sans qu'il ait contamination?

Merci ,

[Edelweiss68]

Pour la réalisation des antibiogrammes il existe des sortes de tampon permettant d'appliquer directement les disques imprégnés d'antibiotiques sur la gélose. Si il s'agit de petites séries, vous pouvez également vous servir d'une pince à épiler passée à la flamme d'un bec bunsen pour déposer votre disque sur la gélose.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitefa0ab781]

non non je ne parle pas des disques ,je parle d'un milieu Mueller hinton additionné de 25 mg d'antibiotique (a titre d'exemple) ,
c'est à dire que la poudre d'antibiotique est incorporée dans le milieu gélosé

[invite2e21fee6]

On fait comme pour tous les milieux gélosés contenant des antibiotiques. La gélose est autoclavée (et stérilisée) puis mise à refroidir à 65° minimum (température suffisante pour maintenir la gélose en sur-fusion mais assez basse pour ne pas dégrader l'antibiotique et pour permettre la manipulation).

On réalise une solution d'antibiotique qu'on filtre stérilement sous hotte à l'aide d'un filtre 0,22 µm (ainsi la solution d'antibiotique est elle aussi stérile). Sous hotte toujours, on ajoute la quantité nécessaire d'antibiotique filtré à la gélose et on coule directement les boites.

[inviteb3bd5afc]

aqualung a raison, Il vaut mieux dissoudre ta poudre dans de l'eau distillée puis de l'ajouter à l'aide d'un filtre anti bactérien, sous atmosphère stérile, à l'aide d'un bec bunsen par exemple.

[invitefa0ab781]

On fait comme pour tous les milieux gélosés contenant des antibiotiques. La gélose est autoclavée (et stérilisée) puis mise à refroidir à 65° minimum (température suffisante pour maintenir la gélose en sur-fusion mais assez basse pour ne pas dégrader l'antibiotique et pour permettre la manipulation).

On réalise une solution d'antibiotique qu'on filtre stérilement sous hotte à l'aide d'un filtre 0,22 µm (ainsi la solution d'antibiotique est elle aussi stérile). Sous hotte toujours, on ajoute la quantité nécessaire d'antibiotique filtré à la gélose et on coule directement les boites.

excusez moi si j'ai bien compris ,je pése stérilement ma poudre d'antibiotique devant un bec bunseu ,une fois la poudre est diluée dans de l'eau distillée stérile je la filtre avec un filtre 0.22Un toujours devant le bec bunsen?
Qu'elle est l'utilitée du filtre 0.22?

Merci

[Edelweiss68]

Qu'elle est l'utilitée du filtre 0.22?

Ben de retenir les particules > à 0.22µm ! C'est ce qu'on appelle une filtration stérilisante.

[invitefa0ab781]

Ben de retenir les particules > à 0.22µm ! C'est ce qu'on appelle une filtration stérilisante.

Autrement dit ,le filtre permet le passage des molécules d'antibiotique et en même temps fait obstacle aux gernes si présence?

[invite2e21fee6]

Voilà exactement. Mais peser la poudre stérilement n'est pas nécessaire. On peut la peser et la filtrer stérilement juste après. Il faut pour ça être sous une atmosphère stérile (bec bunsen ou hotte) avec un contenant stérile (Falcon ou tube stérilisé). On passe la solution antibiotique dans le filtre 0,22µm à l'aide d'une seringue.

[invitefa0ab781]

Je vous remercie infiniment de m'avoir éclairé.