Bonsoir,

J'ai un léger problème dernièrement, je voudrais transformer de manière stable la lignée cellulaire Daudi qui sont donc des cellules non adhérentes. J'essaie de faire des killing curves pour la Zeocin et la Blasticidin et j'utilise pour cela des 35 mm dishes avec 3 ml de milieu.

Outre le fait que c'est assez difficile a différencier les cellules vivantes de celles mortes, le pire reste quand je dois changer le milieu vu que je suis dans l'obligation de centrifuger les cellules pour les récupérer. Hors les antibiotiques tuent une grande partie de mes cellules ce qui empêche les cellules restantes de repartir vu que leur concentration devient trop faible...
Donc si quelqu'un a une idée de comment contourner ce problème je suis preneur.

Et j'en viens a ma seconde question, lors d'une transformation stable on doit observer l'apparition de foci puis sélectionner ces derniers. Autant je vois comment faire avec une lignée cellulaire adhérente mais pour une lignée cellulaire en suspension, ça m'échappe complètement vu qu'on ne peut pas "piquer" les foci.

Merci d'avance.