Effet hook

[invite5f3b92ab]

Bonjour,

Je fais actuellement un stage et travaille à la caractérisation d'anticorps. En faisant des graphiques sur base de résultats de tests Elisa, j'ai remarqué que dans certains cas, il y avait une courbe qui monte, puis descend. On m'a dit qu'il s'agissait de l'effet hook, mais personne n'a su m'expliquer cet effet. Je ne comprend pas pourquoi, quand la concentration en anticorps est trop importante, la DO est faible. Et je ne trouve pas d'explication sur internet.

Quelqu'un pourrait il m'éclairer ?

merci d'avance.
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[invite5005e1fa]

Bonjour,

On parle d'effet hook dans certains cas d'ELISA sandwich (en 1 etape). Lorsque tes Anticorps secondaires ne sont plus en exces par rapport a ton Antigene (Donc le probleme provient de l'Antigene et non de l'Anticorps). En d'autre termes tes Anticorps reactifs vont se lier au complexes Ac capteurs-Ag, mais egalement aux Ag libres (vu que l'Ag est en exces). Il y aura donc moins de complexes "Ac capteur-Ag-Ac reactif" de produits, et donc une chute de ton OD.

Pour resoudre le probleme, le plus simple est soit de realiser l'ELISA en 2 temps en lavant correctement entre les etapes, soit en diluant l'echantillon.

[invite5f3b92ab]

Bonjour,

Merci pour le réponse. Je fais déjà l'élisa en plusieurs parties, et il y a un lavage après coatage de l'antigène, ce n'est donc pas possible qu'il y a des Ag libres, il me semble. Ou j'ai mal compris ? Et je fais déjà plusieurs dilutions, mais je voulais comprendre cet effet.