Bonjour,
Une question quant au rôle du méthanol dans les solutions de staining/destaining pour les Coomassie ? Il limite la diffusion des protéines ?
Même question pour le tampon de transfert pour les WB semi-sec ?
Merci beaucoup pour votre aide !
Je ne connais pas le rôle exact, mais nous on remplace tout ça par de l'éthanol, c'est beaucoup moins toxique et ça marche tout aussi bien
Le méthanol et l'éthanol rendent le gel plus poreux, ce qui permet de faciliter les échanges avec le tampon (que ce soit de transfert ou de staining en coomassie). Cela permet une meilleure pénétration du coomassie dans le gel pour colorer les protéines, et cela facilite la sortie des protéines du gel pour le transfert. Pour le transfert, les solvants ont un intérêt beaucoup plus forts car ils permettent la dissociation du SDS des protéines, ce qui permet aux protéines d'interagir avec la membrane de PVDF par interactions hydrophobes et électrostatiques, mais pas ioniques comme l'exigerait une interaction avec le SDS.
Dernière modification par LXR ; 18/10/2011 à 11h32.
Ok merci beaucoup !
