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HPLC en proteomique



  1. #1
    lubina

    HPLC en proteomique

    Bonjour, j'ai une question, pour un TP, à laquelle je ne suis pas certaine de la réponse.

    Pouvez vous m'aider??

    J’ai une solution contenant environ 70 mg de protéine, base sur une estimation que j’ai effectuée après visualisation sur SDS-PGE. La protéine est diluée dans un tampon Tris à pH 8.0 et son pI est de 6.1. J’ai à ma disposition une colonne Hitrap Q HP de 1 ml et un collecteur de fraction. Je purifie donc ma protéine sur une colonne en utilisant du Tris à pH 8.0 comme tampon de chargement. Après avoir déposé mes fractions sur gel SDS-PAGE, je peux voir la protéine au bon poids moléculaire dans les fractions 10-12, ce qui correspond à 400-500mM de NaCl. Je constate aussi que beaucoup de ma protéine ne s’est pas accrochée à la colonne, puisqu’une bande est visible dans la fraction que j’ai collectée avant d’appliquer mon gradient. Expliquez-moi pourquoi une fraction de ma protéine ne s’est pas attachée à la colonne et ce que j’aurais dû faire pour m’assurer de purifier entièrement ma protéine.

    -----


  2. #2
    U.N.Owen

    Re : HPLC en proteomique

    Ce type de colonne ne peut lier que 50 mg de protéines maximum donc si tu en as 70 mg, tu en perds obligatoirement.

  3. #3
    lubina

    Re : HPLC en proteomique

    merci beaucoup,

    J'avais pensé à la concentration en en sel ou encore utiliser un tampon plus basique, mais je n'avais pas pensé à cela.

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