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Inactiver les RNases



  1. #1
    cleville

    Inactiver les RNases


    ------

    Quels sont les différents moyens de désactiver les RNases de manière irrémédiable? DEPC? Chloroforme? Chaleur? Je cherche surtout des moyens faciles, et non dangereux (si possible évidemment).

    Essentiellement sur du matériel: métal, verre...

    Merci pour votre aide !

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  4. #2
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : Inactiver les RNases

    Ca dépend de quel support on parle.

    dans des tampons simples (TE, H20, etc) on peut utiliser (avec précaution) le DEPC, mais ça inactive les RNases a un instant T. Il faut tout de même rester propre après.

    Sur du matériel biologique, il y a plein d'inhibiteurs (RNAse out, RNasin, etc) qu'on peut utiliser en additif dans les réactions ou la température favorise l'action des RNases (pendant une RT par exemple)

    Sur les surfaces, il y a aussi plusieurs produits (RNase ZAP, etc) qui sont chers pour ce que c'est. Je pense qu'un bon nettoyage acide ou base et/ou SDS, suivi d'un bon rinçage suffit.

    Le meilleur moyen d'éviter les problèmes et de bosser proprement avec du matériel propre, des gants et de la glace quand ça n'est pas contre indiqué

  5. #3
    Guillaume69

    Re : Inactiver les RNases

    Sur les surfaces, il y a aussi plusieurs produits (RNase ZAP, etc) qui sont chers pour ce que c'est.
    Mais très efficaces =)

  6. #4
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : Inactiver les RNases

    j'en ai mais je n'ai jamais vraiment essayé. Tu sais ce qu'il y a dedans ? (a part de l'eau et du SDS )?

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #5
    Guillaume69

    Re : Inactiver les RNases

    Je crois qu'il y a un autre truc en plus (qui fait que c'est par ailleurs toxique et qu'il vaut mieux pas s'en asperger sur soi), mais j'ai oublié le nom...

    Je m'en suis servi abondamment pour des qPCR importantes (échantillons provenant de tissus embryonnaires, donc longs à obtenir... et potentiellement beaucoup de RNAses qui traînent, plus qu'en travaillant sur des cultures de cellules à mon avis), je n'ai quasiment jamais eu d'ARN de mauvaise qualité.

    Mais c'est vrai qu'un flacon se vide vite. Donc si autre chose marche, c'est toujours bon à prendre. Tu utilises du SDS à combien de % ?
    Et tu rinces avec quoi ?! De l'eau RNAse free ?
    Dernière modification par Guillaume69 ; 24/01/2012 à 00h27.

  9. #6
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : Inactiver les RNases

    SDS 10%. ensuite je rince a l'eau distillée autoclavée, en général il n'y a pas de RNase dedans

    De toute façon les RNases viennent le plus souvent de l'intérieur ! Je n'ai jamais eu de problème sur du foie (pourtant je travaille comme un saligaud), par contre faire des beaux extraits de pancréas, même en étant parano de la RNase, il faut s'accrocher (on en vient même a invoquer des divinités diverses, en vain).

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  11. #7
    kamor

    Re : Inactiver les RNases

    le problème de la glace est qu'elle peut être contaminée donc faut bien faire attention de pas "noyer" les tubes dedans, sinon il est possible de contaminer les tubes rien qu'en les ouvrant.
    La chaleur marche très bien, mais marche encore mieux sur les ARN ! Donc tu n'auras plus de RNases (et encore je suis pratiquement sur qu'elle se reforme en abaissant la t°) mais ce ne sera plus important car tes ARN seront détruits.
    Et si mes souvenirs sont bons, même le DEPC ne les inactivent pas irrémédiablement. Ça marche tant qu'il y en a mais une fois que le DEPC s'est dégradé, les RNases retrouvent une seconde jeunesse.

  12. #8
    Yoyo

    Re : Inactiver les RNases

    Salut

    Pour se débarasser d'une RNAse dans une prep d'ARN je ne vois guere que la solution de tout recommencer
    Ca resiste a presque tout ces trucs la Le phénol marche pas mal, mais ca implique pas mal d'étapes après et c'est super toxique donc chiant à manipuler.

    Moi j'ai trouvé que l'utilisatin de pointes à filtres était la meilleure protection contre les RNAse provenant du pipetman.

    YOyo

  13. #9
    Guillaume69

    Re : Inactiver les RNases

    Citation Envoyé par Yoyo Voir le message
    Moi j'ai trouvé que l'utilisatin de pointes à filtres était la meilleure protection contre les RNAse provenant du pipetman.
    Ca me fait penser que j'ai oublié de préciser que j'ai oublier de préciser que j'utilisais RNAse zap + filter-tip.

  14. #10
    cleville

    Re : Inactiver les RNases

    j'ai bien préciser sur du materiel...pas dans mes préparations

    merci

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