contamination culture cellulaire points noirs fixes

[Latour312]

Bonjour,

Nous rencontrons un probleme de contamination de plusieurs de nos cultures cellulaires mais pas toutes. Cette contamination est etrange car le milieu reste "normal" (pas de trouble, pas de modification du pH) mais on observe au microscope des petits points noirs fixes qui sont presents sur les membranes cytoplasmiques des cellules. Lorsqu'on trypsine ces boites de cultures, les points noirs restent sur la boite de culture mais une fraction est transmises a la nouvelle culture probablement par les cellules elles-meme. Ces points noirs augmentent en nombre et les cellules finissent par ne plus se diviser et la culture s'arrete. Apparemment ce ne sont pas des mycoplasmes (suite au test MycoAlert) et de toute facon, on voit cette contamination au microscope en lumiere blanche a faible grossissement. Est-ce que quelqu'un aurait deja rencontrer ce type de contamination et pourrait me dire ce que c'est et surtout ce qu'il est possible de faire SVP?
Pour finir, cela ne touche pas toutes les lignees cellulaires presentent dans le meme incubateur. On peut ecarter le milieu de culture, le PBS et la trypsine car ces solutions sont communes a plusieurs lignees cellulaires et toutes ne sont pas contaminees. LA contamination apparait apres 3-6 jours apres decongelation.

En vous remerciant par avance poru votre reponse,
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[mcombe]

je crois que c'est un champignons surement. moi j'ai déja eu affaire à quelque chose de ce genre de chose, sauf que dans mon cas la contamination survenait mm lorsqu'on mettait au frigot les cultures. en plus on travaillait en milieu stérile.

[nowell]

Bonjour,

Vous dites donc que cela apparait systématiquement après décongélation? Cela veut dire que vos ampoules sont déjà contaminées lorsqu'elles sont congelées non ?
Procédez par une stérilisation maximale de tout votre matériel de culture, évitez les aller et venus trop important à proximité des bench pour éviter que des saloperies ne passe en dessous des verres.
Et j'ai envie de vous dire de tester un méga mix de tous les antibio antifongiques que vous avez dans une de vos boites, et comparez ensuite.
Je ne sais pas ce que vous avez, mettez de la pénicilline, streptomycine, plasmocine, gentamicine... N'excédez par contre pas une concentration totale limite, afin de conserver encore des celles en vie ^^./

Je ne saurais quelles précautions vous donner d'autre.

[gidemartial]

Salut à tous, moi également je pense que cela pourrait bien etre des champignons mais d'où proviennent elles? Probablement pas de l'azote liquide où je l'espère tu ranges tes cellules. Eh bien puisse tu le dis si bien les points restent adhérer sur les boites de culture alors peutre que cellesci sont sont déjà souillées, alors essaie de les observer au mx à l'objectif x10 puis x40 et recherche les points noirs. Essaie d'abord cela et on vera la suite.
Bon courage

[A voir en vidéo sur Futura]

[nowell]

Au passage je pens eà un truc, le bleu trypan marque non seulement les cellules mortes, mais aussi les champignons ! Essayez cela, vous serez fixé.

Cordialement
Nowell

[gidemartial]

salut Latour312, j'aimerais juste savoir ce qu'il en est des contaminations de tes boites sous forme de points noirs. As tu essayé les différentes investigations proposées?
GideMartial