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Transfection transitoire plasmide/siRNA



  1. #1
    lumioguninca

    Transfection transitoire plasmide/siRNA

    Bonjour

    Ma question concerne les mécanismes qui se mettent en place après une transfection transitoire d'un plasmide codant pour une protéine ou d'un siRNA. Je m'explique: quand on transfecte un plasmide d'expression codant pour la GFP par ex c'est transitoire cad qu'au bout de 48H la fluorescence commence à disparaître (dilution globale ou par cellule?) que se passe-t-il pour la descendance:
    - que devient le plasmide dans les cellules filles, comment s'exprime-t-il?
    - que devient la protéine transfectée ici la GFP, les cellules filles sont-elles deux fois moins vertes ou un est verte et l'autre non, ou les cellules filles contiennent encore du plasmide qui s'exprime?
    - la disparition progressive de la fluorescence est-elle due à la dilution de la population ou à la dégradation du plasmide et de la protéine exprimée: quelle cinétique
    - où trouver des papiers ayant étudié cela.

    Dans le cas des siRNA c'est plus compliqué, chez C elegans et les plantes toute la descendance a le gène visé éteint, pourquoi et que se passe-t-il chez les mammifères:
    pendant 8 jours et parfois plus l'extinction du gène d'intérêt est manifeste, comment cela se fait-il et à quoi est-ce du:
    - non dégradation des siRNA
    - génération de nouveaux siRNA similaires
    - grande quantité au départ minimisant la dilution.

    Et dans ce cas comment contourner l'extinction pour prouver la spécificité? La surexpression de la protéine d'intérêt par un plamside d'expression contenant le gène d'in térêt est-il touché par le siRNA??

    merci d'avance de vos réponses
    bien cordialement

    -----

    Dernière modification par lumioguninca ; 07/03/2012 à 11h33. Motif: mode avancé

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