Comment lire un Western blot : pourquoi fait-on telle manip ?
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Comment lire un Western blot : pourquoi fait-on telle manip ?



  1. #1
    invite90359363

    Comment lire un Western blot : pourquoi fait-on telle manip ?


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    Bonjour !

    Dans l'article que j'étudie en ce moment, il y a énormément de Western blot. Je sais à peu près comment on lit et interprète les figures mais je n'arrive pas à savoir à quoi correspondent telle ou telle annotation, je ne les comprends pas.
    Par exemple, dans cet article, on transfecte des cellules provenant d'une lignée COS avec des plasmides (pcDNA3) contenant la séquence d'une protéine rebaptisée XY qui serait impliquée dans la migration cellulaire. Je vous joins une image s'y rapportant...

    1) Dans la figure A, on dit qu'on a immunoprécipité XY (IP: XY). Le fait de diriger des anticorps contre XY (80 kDa) servirait-il de contrôle de dépôt (dire qu'on a bien XY dans ce qu'on a déposé) en plus de monter que cette molécule est bien phosphorylée (PTyr à 80 kDa) ?

    2) Dans la figure B, pourquoi teste-t-on le plasmide pcDNA3 seul ? Il sert de témoin ?

    3) Dans la figure C, à quoi sert la colonne "IgG" ? Est-ce un témoin négatif ? Si c'est le cas, pourquoi utiliser les IgG ? (Cet article ne traite pas d'immunité sur le plan principal, la fonction immunitaire est juste mentionnée comme exemple à propos des rôles multiples de la migration cellulaire. Les IgG ne sont mentionnés nulle part ailleurs.)

    4) Toujours dans cette figure C, à quoi correspond les colonnes "Lysates" et "XY" ? "Lysates" correspond-il à la bouillie de cellules ? Si c'est le cas, mais on a immunoprécipité XY, non ? Quelle est la différence avec la colonne "XY" ? D'ailleurs, c'est quoi cette colonne ??

    Bon, voilà, vous aurez compris que je n'ai rien compris au WB ou plutôt, aux annotations (au moins, j'ai compris que la colonne la plus à droite correspondait aux anticorps utilisés, haha !). Les taches ne sont pas les choses les plus compliquées à comprendre, haha !

    En attendant de recevoir des éclairements, j'espère que mes interrogations ne sont pas trop débiles...
    Merci d'avance pour vos réponses !

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