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probleme de description du protocole de digestion



  1. #1
    hayemaker

    probleme de description du protocole de digestion


    ------

    Salut tout le monde
    J'ai un petit exercice un peu compliqué(ca demande du pratique plus qu etre fait theoriquement),c etait pas clair bon le voila:

    -On veut digerer 2ug d un fragment d'ADN lineaire par les enzymes de restriction EcoRI et/ou BamHI.La solution d'ADN est a 0.5ug/uL.
    -Les enzymes sont a la concentration de 4000u/ml dans une solution de glycerol a 50% sachant que:
    -une unité(1u) d enzyme digere 1ug d'ADN en 1h a 37°C et que pr etre certain que la digestion est totale,on utilise 2fois la quantité d'enzyme.
    -pour que l'enzyme fonctionne correctement,la [GLYCEROL]ne doit pas execerer 5%
    -L'enzyme est fournie avec un tampon de digestion 10fois plus concentré.
    La question c'est decrire le protocole de digestion simple (avec un seul enzyme) et pour double digestion(càd avec les 2 a la fois) en respectant les conditions.

    merci pour votre aide!je serai reconnaissant

    -----

  2. #2
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : probleme de description du protocole de digestion

    c'est pas dur :

    quel volume d'ADN te faut il pour en avoir 2µg ?
    quel quantité d'enzyme faut il pour digérer 2µg ? quel volume ça représente ?

    A cette étape la, quelle est la concentration de glycérol ? plus de 5% ?
    si oui, de combien faut il diluer pour atteindre les 5% ?

    quel volume total ça représenterait ? du coup, combien de tampon concentré pour avoir une concentration finale de 1X ?

    ensuite, compléter avec de l'eau.

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