Bonjour à tous,
Je suis en école d'ingé, 4è année, j'ai donc mis l'étiquette M1-M2, c'est celle qui correspond le plus à mon niveau d'études je crois.
Je vous pose le contexte. J'ai un cours d'analyse biologique (vaste regroupement de diverses techniques d'analyses) dans lequel j'ai un TP d'enzymo basé sur la PPO de pomme. Pas de souci. Les valeurs, les analyses, ça passe pas trop mal.
Simplement, j'ai un léger souci à expliquer le protocole d'extraction qui est le suivant :
Broyer 10g de pomme pendant deux minutes puis ajouter 10mL d'actéone.
Continuer à broyer, puis ajouter 5mL d'acétone, continuer à broyer.
Filtrer sur büchner, rincer le mortier et le filtre avec deux fois 5mL d'acétone, récupérer le précipité et le sécher.
Le suspendre dans 10mL de tampon acétate pH5.6, broyer à nouveau.
Filtrer, mesurer le volume de filtrat.
A ce stade, je suis supposé expliquer chacune des étapes et donner les constituants de la pomme qui ont été solubilisés ou éliminés.
J'ai tendance à dire que l'acétone est là pour détruire les membranes cellulaires et les vacuoles, mais je n'en suis pas certain du tout. Est-ce que l'acétone permettrait aussi de solubiliser les composés phénoliques et donc de les séparer de l'enzyme lors de la première filtration? Pour ce qui est du tampon, il est là pour maintenir le pH (captain obvious) mais alors pourquoi à 5.6, je n'en ai strictement aucune idée.
Et finalement, j'ai tendance à dire qu'à la fin, on garde principalement la PPO, et qu'on a éliminé les composés phénoliques.
Au final je nage.
Si une bonne âme se sent d'attaque pour me donner son avis, je suis preneur.
D'avance, merci,
KienLang
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