durée d'action d'un siRNA

[noirdez]

Bonjour à tous,

Je suis actuellement en mémoire, et afin d'étudier un facteur de transcription (Nrf2), je joue sur son répresseur, la culline-3 (impliquée dans un complexe ubiquitine-ligase).
Je transfecte des cellules (MCF-7) avec un siRNA contre la cul-3 et après 24h, je peux toujours observer la culline-3 en western blot. Les taux protéiques ne diminuent qu'à partir de 48h d'incubation avec le siRNA.

De ce fait, j'ai deux petites questions :
* avez-vous une idée du temps qu'un siRNA met pour réellement dégrader un ARNm ?
* sur base de la demi-vie dans un autre type cellulaire (MEF) qui est de 6,3h, trouvez-vous ça logique de toujours observer la protéine après 24h d'incubation avec le siRNA ?

Merci d'avance pour toute votre aide, très précieuse dans la rédaction de ce mémoire

Belle journée,

Eva
Bruxelles
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[TanguyE]

Bonjour,

Pour avoir fait des RT-PCR sur des HEK 293h traitées par au moins 10 siRNAs différents, j'ai toujours observé un maximum d’extinction d'ARNm entre 48 et 72h après transfection. Le retour à la normale ayant lieu entre 72 et 120h.

Donc non, ça ne m'étonne pas que tu puisse avoir encore de la protéine à 24h voir à 48h.

Si tu as besoin de plus de détails sur l'ARN interférence, la page wikipedia en anglais est très complète et plutôt bien référencée (et m'a été d'une grande aide pour la rédaction de mon mémoire l'an dernier).

cdt

[noirdez]

Merci pour l'info sur wiki et ton expérience professionnelle !
Mais mon promoteur aimerait que je justifie ça plus scientifiquement
Si d'autres personnes ont des infos, je les remercie d'avance