Bonjour à tous,
Voilà, j'ai un petit problème de western blot (Photo ci-dessous à la fin du Message). J'ai effectué avec les même échantillons (lysats d'HAEC pour les 5 premiers puits; Thp1, Monocyte, Macrophage pour les trois dernier puits) deux western blot différents.
Le premier avec un Ac primaire (AC1) à 1:200 (concentration initial 200ug/ml), et un secondaire anti-goat à 1:10000 (concentration suggérée 1:2000)
Le deuxième avec un Ac primaire (AC2) à 1:1000 (concentration initial 1mg/ml), et un secondaire anti-rabbit à 1:20000
Les deux anticorps reconnaissent des protéines différentes, les anticorps secondaires sont différents et pourtant sur chacun de mes gels j'ai des bandes apparemment non spécifique (à 60kDa environ) et exactement identiques d'une membrane à l'autre.
Quelqu'un saurait-il à quoi cela pourrait correspondre....?
A noter malheureusement l'absence de bande spécifique sauf dans le deuxième gel à 16kDa avant dernier puits (monocytes).
De plus l'exposition est très forte, 1,5s au lieu des 400ms que j'utilise d'habitude.
Merci par avance pour votre aide!
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