Pb profiles electrophoretiques de proteines decales

[invite8041f41c]

Bonjour a tous,

Je travaille actuellement sur un appareil utilisant un systeme de plaque avec puits (10 puits pour echantillon et un puit pour le ladder) pour realiser des migrations de proteines (hordeine).
Apres migration des proteines, j'obtiens des profils electrophoretiques de l'echantillon en cours d'analyse: le pb que je rencontre:
lorsque 2 labos differents, analysent un meme echantillon (avec le meme appareil, pas 2 differents de la meme marque mais vraiment le meme), nous observons les memes profiles electrophoretiques de l'enchantillon entre les 2 labos mais nous observons egalement un decalage d'electrophoregrammes lorsqu'on les supperpose.
Cette ''difference'' ou decalage observe entre les 2 labos ne nous permet pas d'exploiter les donnees emanant des electrophoregrammes d'un labo a l'autre...
Ma question: Pk ce decalage entre labos (alors que le materiel et reactifs utilises pour l'analyse sont exactement les memes entre les 2 labos)?
La methode est reproductible selon le facteur ''technicien'' (test effectue et verifie)

En esperant que quelqu'un connaisse la solution ou meme m'apporte qqes pistes...
En vous remerciant par avance

PS: dsl pour les accents, j'ai un pc anglais...

Vincent
-----

[invite02cefc91]

Bonjour,

Tu peux avoir par exemple un léger décalage dans le pourcentage de gel d'acryl (?) qui provoque ce décalage. C'est des gels commerciaux ou fait à la main ? Tu n'auras jamais le même pourcentage de gel si tu le fais main, tu as toujours une légère erreur technique ...

Après, tu peux avoir des variations de tension dans tin transfo qui fait que la migration n'est pas exactement constante entre les deux labos ...

[invite8041f41c]

Bonjour,

Merci pour ces pistes...
Ce sont des plaques (ou cassettes) avec des puits. J'insere dans ces plaques du "gel dye" pour la migration (plaque: aspect de circuit electrique avec des canaux pour la migration). Dans chaque puit,
je depose 6yl d'extraction proteique representant l'echantillon.
La tension: Ce decalage s'observe entre des electrophoregrams d'un labo allemand et ceux d'un labo francais: Crois-tu au probleme de tension entre les 2 labos?? le tranfo de l'appareil devrait normalement convertir
la tension a la meme valeur entre les 2 labos.. Ce sont des petites electrodes qui viennent tremper dans chaque puit et qui apportent une certaine tension pour la migration des proteines dans les canaux de la plaque.
Le gel est un gel standard (produit par une societe americaine) ou il n"y a qu"une petite centrifugation a faire pour le preparer avant son utilisation (memes conditions de preparation du gel entre les deux labos).
Je vais encore un peu bucher dessus pour tenter de decouvrir ce probleme recurrent,
En te remerciant pour ton aide
Vincent