Bonjour,

Est-ce qu'il y aurait quelqu'un susceptible de m'aider pour un test de prolif? Donc le but est de comparer le % de cellules en phase S, entre 2 lignées. J'utilise un kit de chez life technologies Click iT Edu, l'Edu est un analogue du BrdU. Le protocole est somme toute assez classique et je finis par ajouter du 7-AAD. J'ai passé les tubes au Facs et il s'avère que je n'obtiens pas tout à fait le profil en "n" caractérisant les phases du cycle. Apparemment, j'aurais des cellules en phase S qui ne seraient pas marquées, ce qui créée une espece de population entre les phases G0/1 et G2/M.

Quelqu'un pourrait-il m'aider?
Différentes hypothèses, trop de cellules pour la quantité d'anti-Edu? Je respecte cependant les indications du fournisseur qui indique 1 millions de cellules dans 100uL, pas assez longtemps l'Edu? j'ai laissé 1h, ce qui est classiquement recommandé, l'Edu n'est pas assez concentré? j'ai utilisé 10uM, concentration classique... Qu'en est-il pour le 7-AAD? Je rajoute 1uL d'une solution de base de 1mg/mL.

Je n'ai pas d'expérience ni en étude de prolif ni en facs...

Les cellules que j'ai besoin d'analyser sont des cellules cancéreuses du sein (mda-mb-231) et du col de l'utérus (caski).

Heeeeeeelp

Merci!!!